中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2008年
7期
505-509
,共5页
余旭平%胡东建%郑新添%竺春%刘晓宁%于洪涛
餘旭平%鬍東建%鄭新添%竺春%劉曉寧%于洪濤
여욱평%호동건%정신첨%축춘%류효저%우홍도
鹩%圆环病毒%核衣壳蛋白基因%核定位信号%原核表达
鷯%圓環病毒%覈衣殼蛋白基因%覈定位信號%原覈錶達
료%원배병독%핵의각단백기인%핵정위신호%원핵표체
根据已发表的鹅圆环病毒GoCV-yk1株的序列,设计引物扩增出全长核衣壳蛋白基因(Cap),用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后插入到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳检测未见到目的蛋白条带.,应用生物信息学分析确定Cap蛋白的核定位信号区域,新设计一对引物扩增出不包含核定位信号序列编码区的核衣壳蛋白基因,将截短Cap基因克隆入pET-28a进行融合表达,经SDS-PAGE电泳和Western blot检测,截短Cap蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为27.6 ku,表达产物以包涵体形式存在,其表达量可以达菌体总蛋白的18.3%.截短Cap蛋白的高效表达为鹅圆环病毒ELISA检测方法的建立和进一步开展GoCV致病性及其免疫机制的探索奠定了基础.
根據已髮錶的鵝圓環病毒GoCV-yk1株的序列,設計引物擴增齣全長覈衣殼蛋白基因(Cap),用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ雙酶切後插入到原覈錶達載體pET-28a中,轉化大腸桿菌BL21(DE3)進行融閤錶達,經SDS-PAGE電泳檢測未見到目的蛋白條帶.,應用生物信息學分析確定Cap蛋白的覈定位信號區域,新設計一對引物擴增齣不包含覈定位信號序列編碼區的覈衣殼蛋白基因,將截短Cap基因剋隆入pET-28a進行融閤錶達,經SDS-PAGE電泳和Western blot檢測,截短Cap蛋白穫得瞭高效錶達,融閤蛋白的分子量約為27.6 ku,錶達產物以包涵體形式存在,其錶達量可以達菌體總蛋白的18.3%.截短Cap蛋白的高效錶達為鵝圓環病毒ELISA檢測方法的建立和進一步開展GoCV緻病性及其免疫機製的探索奠定瞭基礎.
근거이발표적아원배병독GoCV-yk1주적서렬,설계인물확증출전장핵의각단백기인(Cap),용BamH Ⅰ화EcoR Ⅰ쌍매절후삽입도원핵표체재체pET-28a중,전화대장간균BL21(DE3)진행융합표체,경SDS-PAGE전영검측미견도목적단백조대.,응용생물신식학분석학정Cap단백적핵정위신호구역,신설계일대인물확증출불포함핵정위신호서렬편마구적핵의각단백기인,장절단Cap기인극륭입pET-28a진행융합표체,경SDS-PAGE전영화Western blot검측,절단Cap단백획득료고효표체,융합단백적분자량약위27.6 ku,표체산물이포함체형식존재,기표체량가이체균체총단백적18.3%.절단Cap단백적고효표체위아원배병독ELISA검측방법적건립화진일보개전GoCV치병성급기면역궤제적탐색전정료기출.
