科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2009年
2期
253-256
,共4页
张宁%李英辉%赵亚%刘忠湘%毛张翔%黄豫晓%薛采芳
張寧%李英輝%趙亞%劉忠湘%毛張翔%黃豫曉%薛採芳
장저%리영휘%조아%류충상%모장상%황예효%설채방
HIV-1%复合多表位基因%稳定株
HIV-1%複閤多錶位基因%穩定株
HIV-1%복합다표위기인%은정주
建立稳定表达HIV-1p24MEG复合多表位基因的p815细胞克隆.设计引物,以HIV-1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入pcDNA3.1(+).在阳离子聚合物作用下重组真核质粒转染的p815(H-2d)细胞, 以G418压力筛选,RT-PCR检测mRNA表达,间接免疫荧光检测蛋白表达.通过PCR获得了HIV-1 p24片段,获得了与多表位基因连接后的p24MEG融合基因,成功构建了p24MEG基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/p24MEG.转染p815细胞后, RT-PCR检测到融合蛋白mRNA表达,间接免疫荧光显示 p815细胞内有融合蛋白的表达.结论:建立了稳定表达HIV-1p24MEG融合蛋白的p815细胞克隆,为评价多表位抗原p24MEG在BALB/c小鼠体内诱导的细胞免疫应答奠定基础.
建立穩定錶達HIV-1p24MEG複閤多錶位基因的p815細胞剋隆.設計引物,以HIV-1標準株全長cDNA序列為模闆,PCR擴增穫得p24基因片段;閤成改造後的多箇錶位基因MEG併且與p24片段相連接,剋隆入pcDNA3.1(+).在暘離子聚閤物作用下重組真覈質粒轉染的p815(H-2d)細胞, 以G418壓力篩選,RT-PCR檢測mRNA錶達,間接免疫熒光檢測蛋白錶達.通過PCR穫得瞭HIV-1 p24片段,穫得瞭與多錶位基因連接後的p24MEG融閤基因,成功構建瞭p24MEG基因的重組真覈錶達載體pcDNA3.1(+)/p24MEG.轉染p815細胞後, RT-PCR檢測到融閤蛋白mRNA錶達,間接免疫熒光顯示 p815細胞內有融閤蛋白的錶達.結論:建立瞭穩定錶達HIV-1p24MEG融閤蛋白的p815細胞剋隆,為評價多錶位抗原p24MEG在BALB/c小鼠體內誘導的細胞免疫應答奠定基礎.
건립은정표체HIV-1p24MEG복합다표위기인적p815세포극륭.설계인물,이HIV-1표준주전장cDNA서렬위모판,PCR확증획득p24기인편단;합성개조후적다개표위기인MEG병차여p24편단상련접,극륭입pcDNA3.1(+).재양리자취합물작용하중조진핵질립전염적p815(H-2d)세포, 이G418압력사선,RT-PCR검측mRNA표체,간접면역형광검측단백표체.통과PCR획득료HIV-1 p24편단,획득료여다표위기인련접후적p24MEG융합기인,성공구건료p24MEG기인적중조진핵표체재체pcDNA3.1(+)/p24MEG.전염p815세포후, RT-PCR검측도융합단백mRNA표체,간접면역형광현시 p815세포내유융합단백적표체.결론:건립료은정표체HIV-1p24MEG융합단백적p815세포극륭,위평개다표위항원p24MEG재BALB/c소서체내유도적세포면역응답전정기출.
