中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2010年
9期
783-786
,共4页
张薇%高红梅%叶贤龙%于艺雪%刘铭瑶%王文飞%任桂萍%李德山
張薇%高紅梅%葉賢龍%于藝雪%劉銘瑤%王文飛%任桂萍%李德山
장미%고홍매%협현룡%우예설%류명요%왕문비%임계평%리덕산
小鼠白细胞介素17%克隆%表达%包涵体%活性鉴定
小鼠白細胞介素17%剋隆%錶達%包涵體%活性鑒定
소서백세포개소17%극륭%표체%포함체%활성감정
目的:克隆小鼠白细胞介素17A(mIL-17A)基因,构建mIL-17A原核表达质粒在E.coil Rosetta(DE3)PlysS表达,得到有活性的mIL-17A蛋白.方法:提取人IL-1β免疫的小鼠胸腺总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,根据GenBank报道的mIL-17A序列设计引物,进行巢式PCR,得到成熟mIL-17A的编码序列并构建到pMD18-T载体中,再亚克隆至原核表达载体pHisSUMO Express中,经DNA测序鉴定后转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,Western blot鉴定.纯化后的蛋白处理3T3-L1前体脂肪细胞,real time PCR鉴定白细胞介素6(IL-6)的表达变化.结果:DNA测序证明所克隆基因序列与GenBank报道的完全一致.成功构建了pHisSUMO Express-mIL-17A原核表达质粒以包涵体形式表达了重组mIL-17A蛋白,且Western blot证实为目的蛋白.所得蛋白上调3T3-L1细胞表达IL-6.结论:获得具有生物活性的mIL-17A蛋白,为进一步研究其蛋白特性及其生物活性奠定基础.
目的:剋隆小鼠白細胞介素17A(mIL-17A)基因,構建mIL-17A原覈錶達質粒在E.coil Rosetta(DE3)PlysS錶達,得到有活性的mIL-17A蛋白.方法:提取人IL-1β免疫的小鼠胸腺總RNA,反轉錄成cDNA,以此為模闆,根據GenBank報道的mIL-17A序列設計引物,進行巢式PCR,得到成熟mIL-17A的編碼序列併構建到pMD18-T載體中,再亞剋隆至原覈錶達載體pHisSUMO Express中,經DNA測序鑒定後轉化Rosetta感受態細胞,IPTG誘導錶達,Western blot鑒定.純化後的蛋白處理3T3-L1前體脂肪細胞,real time PCR鑒定白細胞介素6(IL-6)的錶達變化.結果:DNA測序證明所剋隆基因序列與GenBank報道的完全一緻.成功構建瞭pHisSUMO Express-mIL-17A原覈錶達質粒以包涵體形式錶達瞭重組mIL-17A蛋白,且Western blot證實為目的蛋白.所得蛋白上調3T3-L1細胞錶達IL-6.結論:穫得具有生物活性的mIL-17A蛋白,為進一步研究其蛋白特性及其生物活性奠定基礎.
목적:극륭소서백세포개소17A(mIL-17A)기인,구건mIL-17A원핵표체질립재E.coil Rosetta(DE3)PlysS표체,득도유활성적mIL-17A단백.방법:제취인IL-1β면역적소서흉선총RNA,반전록성cDNA,이차위모판,근거GenBank보도적mIL-17A서렬설계인물,진행소식PCR,득도성숙mIL-17A적편마서렬병구건도pMD18-T재체중,재아극륭지원핵표체재체pHisSUMO Express중,경DNA측서감정후전화Rosetta감수태세포,IPTG유도표체,Western blot감정.순화후적단백처리3T3-L1전체지방세포,real time PCR감정백세포개소6(IL-6)적표체변화.결과:DNA측서증명소극륭기인서렬여GenBank보도적완전일치.성공구건료pHisSUMO Express-mIL-17A원핵표체질립이포함체형식표체료중조mIL-17A단백,차Western blot증실위목적단백.소득단백상조3T3-L1세포표체IL-6.결론:획득구유생물활성적mIL-17A단백,위진일보연구기단백특성급기생물활성전정기출.
