中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2010年
9期
824-827
,共4页
龚艺%崔亚利%牛司强%张雪梅%胥文春%何於娟%王虹
龔藝%崔亞利%牛司彊%張雪梅%胥文春%何於娟%王虹
공예%최아리%우사강%장설매%서문춘%하어연%왕홍
肺炎链球菌%SPD0414假想蛋白%表达纯化%多克隆抗体%保守性
肺炎鏈毬菌%SPD0414假想蛋白%錶達純化%多剋隆抗體%保守性
폐염련구균%SPD0414가상단백%표체순화%다극륭항체%보수성
目的:获得纯化的肺炎链球菌(S.pn)重组假想蛋白SPD0414,并分析其在常见S.pn菌株中的保守性.方法:利用PCR方法扩增SPD0414蛋白胞外区核酸序列,将其克隆到原核表达载体ppSUMO内,转化到E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后Ni-NTA树脂纯化重组蛋白.用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白特异性及纯度.通过纯化蛋白免疫BALB/c小鼠制备其多克隆抗体,并用间接ELISA检测多克隆抗体的效价,Western blot方法分析多克隆抗体的特异性,同时,鉴定该蛋白在6种常见肺炎链球菌分离株的保守性.结果:克隆的SPD0414序列与Gene Bank中的数据相符,并实现了重组SPD0414蛋白高水平的可溶表达纯化蛋白免疫BALB/c小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体,Western blot验证SPD0414蛋白在6株常见肺炎链球菌菌株中均有表达.结论:成功制备了高滴度、高特异性的SPD0414多克隆抗体,证实了SPD0414在肺炎链球菌不同菌株间保守性较高,为肺炎链球菌多肽联合疫苗的研制奠定了基础.
目的:穫得純化的肺炎鏈毬菌(S.pn)重組假想蛋白SPD0414,併分析其在常見S.pn菌株中的保守性.方法:利用PCR方法擴增SPD0414蛋白胞外區覈痠序列,將其剋隆到原覈錶達載體ppSUMO內,轉化到E.coli BL21(DE3)中,經IPTG誘導錶達後Ni-NTA樹脂純化重組蛋白.用SDS-PAGE和Western blot鑒定蛋白特異性及純度.通過純化蛋白免疫BALB/c小鼠製備其多剋隆抗體,併用間接ELISA檢測多剋隆抗體的效價,Western blot方法分析多剋隆抗體的特異性,同時,鑒定該蛋白在6種常見肺炎鏈毬菌分離株的保守性.結果:剋隆的SPD0414序列與Gene Bank中的數據相符,併實現瞭重組SPD0414蛋白高水平的可溶錶達純化蛋白免疫BALB/c小鼠穫得高滴度、高特異性的的多剋隆抗體,Western blot驗證SPD0414蛋白在6株常見肺炎鏈毬菌菌株中均有錶達.結論:成功製備瞭高滴度、高特異性的SPD0414多剋隆抗體,證實瞭SPD0414在肺炎鏈毬菌不同菌株間保守性較高,為肺炎鏈毬菌多肽聯閤疫苗的研製奠定瞭基礎.
목적:획득순화적폐염련구균(S.pn)중조가상단백SPD0414,병분석기재상견S.pn균주중적보수성.방법:이용PCR방법확증SPD0414단백포외구핵산서렬,장기극륭도원핵표체재체ppSUMO내,전화도E.coli BL21(DE3)중,경IPTG유도표체후Ni-NTA수지순화중조단백.용SDS-PAGE화Western blot감정단백특이성급순도.통과순화단백면역BALB/c소서제비기다극륭항체,병용간접ELISA검측다극륭항체적효개,Western blot방법분석다극륭항체적특이성,동시,감정해단백재6충상견폐염련구균분리주적보수성.결과:극륭적SPD0414서렬여Gene Bank중적수거상부,병실현료중조SPD0414단백고수평적가용표체순화단백면역BALB/c소서획득고적도、고특이성적적다극륭항체,Western blot험증SPD0414단백재6주상견폐염련구균균주중균유표체.결론:성공제비료고적도、고특이성적SPD0414다극륭항체,증실료SPD0414재폐염련구균불동균주간보수성교고,위폐염련구균다태연합역묘적연제전정료기출.
