畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2010年
11期
1371-1378
,共8页
李步高%郭晓红%曹果清%杨晓奋%王效京%周忠孝
李步高%郭曉紅%曹果清%楊曉奮%王效京%週忠孝
리보고%곽효홍%조과청%양효강%왕효경%주충효
猪%DECR1基因%克隆%RACE%序列分析%原核表达
豬%DECR1基因%剋隆%RACE%序列分析%原覈錶達
저%DECR1기인%극륭%RACE%서렬분석%원핵표체
旨在研究猪2,4-dienoyl-CoA reductasel(DECR1)基因的结构,揭示该基因的原核表达规律.试验以山西马身猪的肝脏组织为材料,采用RT-PCR与RACE技术克隆了DECRl基因的cDNA全序列,并将其重组于pET32a+原核表达载体中,经酶切、序列鉴定正确后,重组质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达.结果表明:猪DECR1基因的cDNA全长2 352 bp,包括987 bp的开放阅读框(ORF),53 bp的5'非翻译区(UTR)和1 312 bp的3'-UTR;编码区(CDS)编码328个氨基酸残基与猪(电子预测序列)、牛、人、猩猩、猴、马、犬、鼠相应序列的同源性分别为99%、88%、88%,87%,87%、87%、87%和83%;SDS-PAGE电泳结果显示,在IPTG诱导4 h时,外源蛋白表达效率最高;Western blot检测发现经诱导表达的蛋白产物大小约为35 ku,与预测的大小一致.猪DECR1基因的克隆和表达研究,为进一步探究该基因的生物学功能及其分子遗传机制提供了理论基础.
旨在研究豬2,4-dienoyl-CoA reductasel(DECR1)基因的結構,揭示該基因的原覈錶達規律.試驗以山西馬身豬的肝髒組織為材料,採用RT-PCR與RACE技術剋隆瞭DECRl基因的cDNA全序列,併將其重組于pET32a+原覈錶達載體中,經酶切、序列鑒定正確後,重組質粒轉化大腸桿菌BL21進行誘導錶達.結果錶明:豬DECR1基因的cDNA全長2 352 bp,包括987 bp的開放閱讀框(ORF),53 bp的5'非翻譯區(UTR)和1 312 bp的3'-UTR;編碼區(CDS)編碼328箇氨基痠殘基與豬(電子預測序列)、牛、人、猩猩、猴、馬、犬、鼠相應序列的同源性分彆為99%、88%、88%,87%,87%、87%、87%和83%;SDS-PAGE電泳結果顯示,在IPTG誘導4 h時,外源蛋白錶達效率最高;Western blot檢測髮現經誘導錶達的蛋白產物大小約為35 ku,與預測的大小一緻.豬DECR1基因的剋隆和錶達研究,為進一步探究該基因的生物學功能及其分子遺傳機製提供瞭理論基礎.
지재연구저2,4-dienoyl-CoA reductasel(DECR1)기인적결구,게시해기인적원핵표체규률.시험이산서마신저적간장조직위재료,채용RT-PCR여RACE기술극륭료DECRl기인적cDNA전서렬,병장기중조우pET32a+원핵표체재체중,경매절、서렬감정정학후,중조질립전화대장간균BL21진행유도표체.결과표명:저DECR1기인적cDNA전장2 352 bp,포괄987 bp적개방열독광(ORF),53 bp적5'비번역구(UTR)화1 312 bp적3'-UTR;편마구(CDS)편마328개안기산잔기여저(전자예측서렬)、우、인、성성、후、마、견、서상응서렬적동원성분별위99%、88%、88%,87%,87%、87%、87%화83%;SDS-PAGE전영결과현시,재IPTG유도4 h시,외원단백표체효솔최고;Western blot검측발현경유도표체적단백산물대소약위35 ku,여예측적대소일치.저DECR1기인적극륭화표체연구,위진일보탐구해기인적생물학공능급기분자유전궤제제공료이론기출.
