南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
3期
512-517
,共6页
陈盼盼%张丽华%董为人%刘杰明%张易%乔伟光%陈英华%赵姝%郭家松
陳盼盼%張麗華%董為人%劉傑明%張易%喬偉光%陳英華%趙姝%郭傢鬆
진반반%장려화%동위인%류걸명%장역%교위광%진영화%조주%곽가송
脂肪组织源性干细胞%分化%神经干细胞%神经元
脂肪組織源性榦細胞%分化%神經榦細胞%神經元
지방조직원성간세포%분화%신경간세포%신경원
目的 探讨脂肪组织源性干细胞(ADSCs)诱导分化为神经元样细胞的可行性.方法 ADSCs分离自雄性SD大鼠附睾脂肪垫,差速贴壁法纯化ADSCs,传至第3代培养细胞行流式细胞术行表型鉴定(CD106,CD11b,CD45,CD90,CD29,CD49d),并进行成脂诱导.取鉴定后的ADSCs用分步诱导法,即先用含10 ng/ml碱性成纤维细胞牛长因子(bFGF)、20ng/ml表皮生长因子(EGF)、2%B27的DMEM/F12培养基1培养,诱导其向神经干细胞转分化,再用含10 ng/ml胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),10 ng/ml脑源性神经营养因子(BDNF),1μmol/L维甲酸(RA)的培养基Ⅱ诱导分化为神经元样细胞(NLCs),免疫细胞化学法鉴定细胞表面标记物巢蛋白(nestin),神经细胞特异性标志微管相关蛋白(MAP2),神经元核蛋白(NeuN).结果 分离纯化的ADSCs CD90、CD29表达强阳性;成脂诱导分化后细胞油红O染色阳性;ADSCs经培养基Ⅰ培养7 d后聚集成球样细胞团悬浮于培养液中,表达nestin;继而用培养基Ⅱ诱导分化4 h后细胞球逐渐贴壁,球周边少数细胞向外发出突起,形似神经元,MAP2、NeuN均呈阳性.结论 特定条件下,ADSCs在体外町被逐步诱导分化为NLCs.
目的 探討脂肪組織源性榦細胞(ADSCs)誘導分化為神經元樣細胞的可行性.方法 ADSCs分離自雄性SD大鼠附睪脂肪墊,差速貼壁法純化ADSCs,傳至第3代培養細胞行流式細胞術行錶型鑒定(CD106,CD11b,CD45,CD90,CD29,CD49d),併進行成脂誘導.取鑒定後的ADSCs用分步誘導法,即先用含10 ng/ml堿性成纖維細胞牛長因子(bFGF)、20ng/ml錶皮生長因子(EGF)、2%B27的DMEM/F12培養基1培養,誘導其嚮神經榦細胞轉分化,再用含10 ng/ml膠質細胞源性神經營養因子(GDNF),10 ng/ml腦源性神經營養因子(BDNF),1μmol/L維甲痠(RA)的培養基Ⅱ誘導分化為神經元樣細胞(NLCs),免疫細胞化學法鑒定細胞錶麵標記物巢蛋白(nestin),神經細胞特異性標誌微管相關蛋白(MAP2),神經元覈蛋白(NeuN).結果 分離純化的ADSCs CD90、CD29錶達彊暘性;成脂誘導分化後細胞油紅O染色暘性;ADSCs經培養基Ⅰ培養7 d後聚集成毬樣細胞糰懸浮于培養液中,錶達nestin;繼而用培養基Ⅱ誘導分化4 h後細胞毬逐漸貼壁,毬週邊少數細胞嚮外髮齣突起,形似神經元,MAP2、NeuN均呈暘性.結論 特定條件下,ADSCs在體外町被逐步誘導分化為NLCs.
목적 탐토지방조직원성간세포(ADSCs)유도분화위신경원양세포적가행성.방법 ADSCs분리자웅성SD대서부고지방점,차속첩벽법순화ADSCs,전지제3대배양세포행류식세포술행표형감정(CD106,CD11b,CD45,CD90,CD29,CD49d),병진행성지유도.취감정후적ADSCs용분보유도법,즉선용함10 ng/ml감성성섬유세포우장인자(bFGF)、20ng/ml표피생장인자(EGF)、2%B27적DMEM/F12배양기1배양,유도기향신경간세포전분화,재용함10 ng/ml효질세포원성신경영양인자(GDNF),10 ng/ml뇌원성신경영양인자(BDNF),1μmol/L유갑산(RA)적배양기Ⅱ유도분화위신경원양세포(NLCs),면역세포화학법감정세포표면표기물소단백(nestin),신경세포특이성표지미관상관단백(MAP2),신경원핵단백(NeuN).결과 분리순화적ADSCs CD90、CD29표체강양성;성지유도분화후세포유홍O염색양성;ADSCs경배양기Ⅰ배양7 d후취집성구양세포단현부우배양액중,표체nestin;계이용배양기Ⅱ유도분화4 h후세포구축점첩벽,구주변소수세포향외발출돌기,형사신경원,MAP2、NeuN균정양성.결론 특정조건하,ADSCs재체외정피축보유도분화위NLCs.
