中国南方果树
中國南方果樹
중국남방과수
SOUTH CHINA FRUITS
2012年
3期
6-11
,共6页
柑桔%钙离子结合蛋白基因%基因克隆%遗传转化
柑桔%鈣離子結閤蛋白基因%基因剋隆%遺傳轉化
감길%개리자결합단백기인%기인극륭%유전전화
以伏令夏橙叶片中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到一条约600 bp、含钙离子结 合蛋白基因(CsCaBP)的片段,将此片段克隆到pMD-19T中,经测序分析该片段与甜橙基因组中的对应序列完全吻合.设计2对带有限制性内切酶位点的特异性引物,以cDNA为模板扩增到2个CsCaBP片段,并连接到TA克隆载体pMD-19T上；经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pFGC5941的查耳酮合成酶(CHSA)内含子两侧,构建成功CsCaBP的RNA干扰载体,但未获得转基因植株.将CsCaBP的正向片段定向克隆到具有CaMV35S启动子的pFGC5941表达质粒上,构建成功CsCaBP过量表达载体.将构建好的表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,转化酸橙下胚轴,经PCR检测,获得9株过量表达转基因植株,荧光定量PCR验证发现目的基因在转基因植株中有不同程度的表达.
以伏令夏橙葉片中分離的總RNA為模闆,經RT-PCR擴增到一條約600 bp、含鈣離子結 閤蛋白基因(CsCaBP)的片段,將此片段剋隆到pMD-19T中,經測序分析該片段與甜橙基因組中的對應序列完全吻閤.設計2對帶有限製性內切酶位點的特異性引物,以cDNA為模闆擴增到2箇CsCaBP片段,併連接到TA剋隆載體pMD-19T上；經雙酶切消化後,分彆以正反2箇方嚮插入到植物錶達載體pFGC5941的查耳酮閤成酶(CHSA)內含子兩側,構建成功CsCaBP的RNA榦擾載體,但未穫得轉基因植株.將CsCaBP的正嚮片段定嚮剋隆到具有CaMV35S啟動子的pFGC5941錶達質粒上,構建成功CsCaBP過量錶達載體.將構建好的錶達載體導入根癌農桿菌LBA4404菌株,轉化痠橙下胚軸,經PCR檢測,穫得9株過量錶達轉基因植株,熒光定量PCR驗證髮現目的基因在轉基因植株中有不同程度的錶達.
이복령하등협편중분리적총RNA위모판,경RT-PCR확증도일조약600 bp、함개리자결 합단백기인(CsCaBP)적편단,장차편단극륭도pMD-19T중,경측서분석해편단여첨등기인조중적대응서렬완전문합.설계2대대유한제성내절매위점적특이성인물,이cDNA위모판확증도2개CsCaBP편단,병련접도TA극륭재체pMD-19T상；경쌍매절소화후,분별이정반2개방향삽입도식물표체재체pFGC5941적사이동합성매(CHSA)내함자량측,구건성공CsCaBP적RNA간우재체,단미획득전기인식주.장CsCaBP적정향편단정향극륭도구유CaMV35S계동자적pFGC5941표체질립상,구건성공CsCaBP과량표체재체.장구건호적표체재체도입근암농간균LBA4404균주,전화산등하배축,경PCR검측,획득9주과량표체전기인식주,형광정량PCR험증발현목적기인재전기인식주중유불동정도적표체.
