江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
4期
797-803
,共7页
张秀华%赵云程%林嘉鹏%汪立芹%周川%石庆华%黄俊成
張秀華%趙雲程%林嘉鵬%汪立芹%週川%石慶華%黃俊成
장수화%조운정%림가붕%왕립근%주천%석경화%황준성
绵羊类胚胎干细胞%多能性调控因子%体外培养%候选基因
綿羊類胚胎榦細胞%多能性調控因子%體外培養%候選基因
면양류배태간세포%다능성조공인자%체외배양%후선기인
为筛选出能够维持绵羊类胚胎干细胞(oESC-like)多能性的因子,以oESC-like为材料,在N2B27/CH/bFGF培养体系中,分别加入PD、PD/hLIF、PD/BPM4、PD/hLIF/BMP4,培养细胞8d,分析绵羊类胚胎干细胞多能性,确定最适培养体系.结果显示:在N2B27/CH/bFGF培养体系添加PD或PD/hLIF后,oESC-like细胞生长较好；所有培养液中oESC-like细胞的AKP染色及多能性候选基因Sox2和Oct4免疫荧光蛋白染色结果均呈阳性；添加PD后,多能性候选基因Oct4与Klf4 mRNA的表达量显著高于N2B27/CH/bFGF培养体系中的(P＜0.01),Nestin与Lin28的表达量显著降低(P＜0.Ol),Sox2与c-Myc升高但差异不显著.添加PD/hLIF后,Oct4的表达量显著高于N2B27/CH/bFGF培养体系中的(P＜0.01),c-Myc、Klf4、Lin28表达量升高但不显著,Nestin和Sox2表达量降低但也不显著.以上结果表明:在oESC-like培养体系中,添加PD或PD/hLIF可能有利于维持绵羊类胚胎干细胞的多能性.
為篩選齣能夠維持綿羊類胚胎榦細胞(oESC-like)多能性的因子,以oESC-like為材料,在N2B27/CH/bFGF培養體繫中,分彆加入PD、PD/hLIF、PD/BPM4、PD/hLIF/BMP4,培養細胞8d,分析綿羊類胚胎榦細胞多能性,確定最適培養體繫.結果顯示:在N2B27/CH/bFGF培養體繫添加PD或PD/hLIF後,oESC-like細胞生長較好；所有培養液中oESC-like細胞的AKP染色及多能性候選基因Sox2和Oct4免疫熒光蛋白染色結果均呈暘性；添加PD後,多能性候選基因Oct4與Klf4 mRNA的錶達量顯著高于N2B27/CH/bFGF培養體繫中的(P＜0.01),Nestin與Lin28的錶達量顯著降低(P＜0.Ol),Sox2與c-Myc升高但差異不顯著.添加PD/hLIF後,Oct4的錶達量顯著高于N2B27/CH/bFGF培養體繫中的(P＜0.01),c-Myc、Klf4、Lin28錶達量升高但不顯著,Nestin和Sox2錶達量降低但也不顯著.以上結果錶明:在oESC-like培養體繫中,添加PD或PD/hLIF可能有利于維持綿羊類胚胎榦細胞的多能性.
위사선출능구유지면양류배태간세포(oESC-like)다능성적인자,이oESC-like위재료,재N2B27/CH/bFGF배양체계중,분별가입PD、PD/hLIF、PD/BPM4、PD/hLIF/BMP4,배양세포8d,분석면양류배태간세포다능성,학정최괄배양체계.결과현시:재N2B27/CH/bFGF배양체계첨가PD혹PD/hLIF후,oESC-like세포생장교호；소유배양액중oESC-like세포적AKP염색급다능성후선기인Sox2화Oct4면역형광단백염색결과균정양성；첨가PD후,다능성후선기인Oct4여Klf4 mRNA적표체량현저고우N2B27/CH/bFGF배양체계중적(P＜0.01),Nestin여Lin28적표체량현저강저(P＜0.Ol),Sox2여c-Myc승고단차이불현저.첨가PD/hLIF후,Oct4적표체량현저고우N2B27/CH/bFGF배양체계중적(P＜0.01),c-Myc、Klf4、Lin28표체량승고단불현저,Nestin화Sox2표체량강저단야불현저.이상결과표명:재oESC-like배양체계중,첨가PD혹PD/hLIF가능유리우유지면양류배태간세포적다능성.
