水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2012年
4期
640-645
,共6页
范勇%于广欣%汪乐霓%曲芳兵%冷鹂%兰利琼%卿人韦
範勇%于廣訢%汪樂霓%麯芳兵%冷鸝%蘭利瓊%卿人韋
범용%우엄흔%왕악예%곡방병%랭리%란리경%경인위
雨生红球藻%虾青素%质体球滴%基因克隆%原核表达%抗体
雨生紅毬藻%蝦青素%質體毬滴%基因剋隆%原覈錶達%抗體
우생홍구조%하청소%질체구적%기인극륭%원핵표체%항체
叶绿体或者有色体中的质体球滴结构(Plastoglobules)是多数植物的类胡萝卜素等次生代谢产物积累的场所,但在能大量积累虾青素的雨生红球藻中,这个结构一直没有得到确认.通过透射电子显微镜观察发现雨生红球藻的质体内确切存在plastoglobules结构;并通过RT-PCR结合RACE技术,从雨生红球藻cDNA文库中克隆到了与编码plastoglobules的结构蛋白(Plastoglobulin)具有高度同源性的基因序列全长,称做Hpgp基因;该基因的表达产物称之为雨生红球藻质体球滴蛋白(HPGP; Haematococcus plastoglobules protein);并进一步利用原核表达系统将该编码基因进行原核诱导表达,用His-Tag蛋白分离纯化系统纯化到了目标蛋白,并用该His-Tag融合蛋白为抗原免疫实验兔,制备到了相应的一抗抗体,为下一步对该蛋白的功能阐明以及雨生红球藻的虾青素积累机制研究提供重要的基础.
葉綠體或者有色體中的質體毬滴結構(Plastoglobules)是多數植物的類鬍蘿蔔素等次生代謝產物積纍的場所,但在能大量積纍蝦青素的雨生紅毬藻中,這箇結構一直沒有得到確認.通過透射電子顯微鏡觀察髮現雨生紅毬藻的質體內確切存在plastoglobules結構;併通過RT-PCR結閤RACE技術,從雨生紅毬藻cDNA文庫中剋隆到瞭與編碼plastoglobules的結構蛋白(Plastoglobulin)具有高度同源性的基因序列全長,稱做Hpgp基因;該基因的錶達產物稱之為雨生紅毬藻質體毬滴蛋白(HPGP; Haematococcus plastoglobules protein);併進一步利用原覈錶達繫統將該編碼基因進行原覈誘導錶達,用His-Tag蛋白分離純化繫統純化到瞭目標蛋白,併用該His-Tag融閤蛋白為抗原免疫實驗兔,製備到瞭相應的一抗抗體,為下一步對該蛋白的功能闡明以及雨生紅毬藻的蝦青素積纍機製研究提供重要的基礎.
협록체혹자유색체중적질체구적결구(Plastoglobules)시다수식물적류호라복소등차생대사산물적루적장소,단재능대량적루하청소적우생홍구조중,저개결구일직몰유득도학인.통과투사전자현미경관찰발현우생홍구조적질체내학절존재plastoglobules결구;병통과RT-PCR결합RACE기술,종우생홍구조cDNA문고중극륭도료여편마plastoglobules적결구단백(Plastoglobulin)구유고도동원성적기인서렬전장,칭주Hpgp기인;해기인적표체산물칭지위우생홍구조질체구적단백(HPGP; Haematococcus plastoglobules protein);병진일보이용원핵표체계통장해편마기인진행원핵유도표체,용His-Tag단백분리순화계통순화도료목표단백,병용해His-Tag융합단백위항원면역실험토,제비도료상응적일항항체,위하일보대해단백적공능천명이급우생홍구조적하청소적루궤제연구제공중요적기출.