北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2007年
1期
67-71
,共5页
低氧%肌成纤维细胞%纤连蛋白类%结缔组织%生长物质
低氧%肌成纖維細胞%纖連蛋白類%結締組織%生長物質
저양%기성섬유세포%섬련단백류%결체조직%생장물질
目的:观察低氧对肾肌成纤维细胞合成和分泌结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和细胞外基质纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响,以了解肌成纤维细胞在肾间质纤维化过程中的作用.方法:(1)采用原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,以密闭的细胞培养罐造成低氧环境(1%O2 ,体积分数),应用Western blot方法检测低氧和正常氧(21%O2 ,体积分数)条件下低氧诱导因子-1α( hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)蛋白的表达,验证所营造的低氧条件是可靠的.(2)用Western blot方法检测在低氧和正常氧条件下,各时间点上细胞及上清液中CTGF和FN蛋白水平.(3) 用RT-PCR方法检测低氧和正常氧条件下,各时间点FN mRNA表达的变化.(4)用明胶酶谱法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotei- nase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP -9)的活性.结果:正常氧组HIF-1α蛋白表达微弱,低氧组有较高水平HIF-1α蛋白表达.低氧作用于原代培养的肌成纤维细胞6 h,12 h和24 h后细胞内的CTGF蛋白均比正常氧组增高,分别为175%±52%,347%±67%和143%±27%,以12 h最明显(P＜0.05);低氧刺激24 h时上清液中CTGF蛋白显著增加,是正常氧组的348%±99%(P＜0.05);低氧刺激肌成纤维细胞6 h,12 h和24 h后上清液中FN蛋白水平增加,分别是正常氧组的187%±42%,199%±51%和210%±29%,以24 h 最明显(P＜0.05),而对应时间点上清液中MMP-9和MMP-2活性无明显变化,但细胞内FN蛋白减少,低氧剌激6 h为正常氧组的64%±13%.低氧刺激肌成纤维细胞3 h,FN的mRNA水平开始上升,6 h达到正常氧组的135%±13%(P＜0.05),12 h 下降接近正常氧水平.结论 :低氧可通过促进肌成纤维细胞表达CTGF和FN参与肾间质纤维化的进展.
目的:觀察低氧對腎肌成纖維細胞閤成和分泌結締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)和細胞外基質纖維連接蛋白(fibronectin,FN)的影響,以瞭解肌成纖維細胞在腎間質纖維化過程中的作用.方法:(1)採用原代培養正常大鼠腎皮質肌成纖維細胞,以密閉的細胞培養罐造成低氧環境(1%O2 ,體積分數),應用Western blot方法檢測低氧和正常氧(21%O2 ,體積分數)條件下低氧誘導因子-1α( hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)蛋白的錶達,驗證所營造的低氧條件是可靠的.(2)用Western blot方法檢測在低氧和正常氧條件下,各時間點上細胞及上清液中CTGF和FN蛋白水平.(3) 用RT-PCR方法檢測低氧和正常氧條件下,各時間點FN mRNA錶達的變化.(4)用明膠酶譜法檢測細胞上清液中基質金屬蛋白酶-2(matrix metalloprotei- nase-2,MMP-2)和基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP -9)的活性.結果:正常氧組HIF-1α蛋白錶達微弱,低氧組有較高水平HIF-1α蛋白錶達.低氧作用于原代培養的肌成纖維細胞6 h,12 h和24 h後細胞內的CTGF蛋白均比正常氧組增高,分彆為175%±52%,347%±67%和143%±27%,以12 h最明顯(P＜0.05);低氧刺激24 h時上清液中CTGF蛋白顯著增加,是正常氧組的348%±99%(P＜0.05);低氧刺激肌成纖維細胞6 h,12 h和24 h後上清液中FN蛋白水平增加,分彆是正常氧組的187%±42%,199%±51%和210%±29%,以24 h 最明顯(P＜0.05),而對應時間點上清液中MMP-9和MMP-2活性無明顯變化,但細胞內FN蛋白減少,低氧剌激6 h為正常氧組的64%±13%.低氧刺激肌成纖維細胞3 h,FN的mRNA水平開始上升,6 h達到正常氧組的135%±13%(P＜0.05),12 h 下降接近正常氧水平.結論 :低氧可通過促進肌成纖維細胞錶達CTGF和FN參與腎間質纖維化的進展.
목적:관찰저양대신기성섬유세포합성화분비결체조직생장인자(connective tissue growth factor,CTGF)화세포외기질섬유련접단백(fibronectin,FN)적영향,이료해기성섬유세포재신간질섬유화과정중적작용.방법:(1)채용원대배양정상대서신피질기성섬유세포,이밀폐적세포배양관조성저양배경(1%O2 ,체적분수),응용Western blot방법검측저양화정상양(21%O2 ,체적분수)조건하저양유도인자-1α( hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)단백적표체,험증소영조적저양조건시가고적.(2)용Western blot방법검측재저양화정상양조건하,각시간점상세포급상청액중CTGF화FN단백수평.(3) 용RT-PCR방법검측저양화정상양조건하,각시간점FN mRNA표체적변화.(4)용명효매보법검측세포상청액중기질금속단백매-2(matrix metalloprotei- nase-2,MMP-2)화기질금속단백매-9(matrix metalloproteinase-9,MMP -9)적활성.결과:정상양조HIF-1α단백표체미약,저양조유교고수평HIF-1α단백표체.저양작용우원대배양적기성섬유세포6 h,12 h화24 h후세포내적CTGF단백균비정상양조증고,분별위175%±52%,347%±67%화143%±27%,이12 h최명현(P＜0.05);저양자격24 h시상청액중CTGF단백현저증가,시정상양조적348%±99%(P＜0.05);저양자격기성섬유세포6 h,12 h화24 h후상청액중FN단백수평증가,분별시정상양조적187%±42%,199%±51%화210%±29%,이24 h 최명현(P＜0.05),이대응시간점상청액중MMP-9화MMP-2활성무명현변화,단세포내FN단백감소,저양랄격6 h위정상양조적64%±13%.저양자격기성섬유세포3 h,FN적mRNA수평개시상승,6 h체도정상양조적135%±13%(P＜0.05),12 h 하강접근정상양수평.결론 :저양가통과촉진기성섬유세포표체CTGF화FN삼여신간질섬유화적진전.
