中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2009年
3期
212-218
,共7页
鲁云霞%孙玉秀%汪凌云%张吕钊%李丹丹%李俊
魯雲霞%孫玉秀%汪凌雲%張呂釗%李丹丹%李俊
로운하%손옥수%왕릉운%장려쇠%리단단%리준
蛋白酪氨酸磷酸酶,非受体1型%糖尿病,2型%胰岛素
蛋白酪氨痠燐痠酶,非受體1型%糖尿病,2型%胰島素
단백락안산린산매,비수체1형%당뇨병,2형%이도소
目的 高效诱导表达并纯化具有活性的重组PTP1B融合蛋白(rhPTP1B),进行酶活性及抑制剂的实验.方法 重组体pGEX-hPTP1B转化E.coliDH5a,诱导表达rhPTP1B并优化条件后,超声取细胞裂解上清液经GST亲和层析柱纯化后,利用rhPTP1B水解特异性底物4-硝基苯基磷酸二钠盐(pNPP-Na2)的磷酸基团而产生颜色反应来测定rhPTP1B活性,并分析其与rhPTP1B浓度、底物浓度及反应温度的关系,钒酸钠(Na3VO4)抑制类型的研究,老鹰茶总黄酮(TFLC)对rhPTP1B的抑制性作用和浓度依赖关系.结果 rhPTP1B表达的最适条件是在34℃和2.0 mmol/LIPTG下诱导表达10 h,可被GST亲和层析法分离纯化:其活性随酶浓度及底物浓度的增加而增加,35℃时rhPTP1B的活性最大;钒酸钠的作用机制可能为非竞争性抑制作用;TFLC对rhPTP1B有明显的抑制作用.结论 诱导表达纯化的rhPTP1B融合蛋白可用于抑制剂的研究,TFLC对rhPT1B的强抑制作用可能是其降低糖尿病大鼠血糖浓度的机制之一.
目的 高效誘導錶達併純化具有活性的重組PTP1B融閤蛋白(rhPTP1B),進行酶活性及抑製劑的實驗.方法 重組體pGEX-hPTP1B轉化E.coliDH5a,誘導錶達rhPTP1B併優化條件後,超聲取細胞裂解上清液經GST親和層析柱純化後,利用rhPTP1B水解特異性底物4-硝基苯基燐痠二鈉鹽(pNPP-Na2)的燐痠基糰而產生顏色反應來測定rhPTP1B活性,併分析其與rhPTP1B濃度、底物濃度及反應溫度的關繫,釩痠鈉(Na3VO4)抑製類型的研究,老鷹茶總黃酮(TFLC)對rhPTP1B的抑製性作用和濃度依賴關繫.結果 rhPTP1B錶達的最適條件是在34℃和2.0 mmol/LIPTG下誘導錶達10 h,可被GST親和層析法分離純化:其活性隨酶濃度及底物濃度的增加而增加,35℃時rhPTP1B的活性最大;釩痠鈉的作用機製可能為非競爭性抑製作用;TFLC對rhPTP1B有明顯的抑製作用.結論 誘導錶達純化的rhPTP1B融閤蛋白可用于抑製劑的研究,TFLC對rhPT1B的彊抑製作用可能是其降低糖尿病大鼠血糖濃度的機製之一.
목적 고효유도표체병순화구유활성적중조PTP1B융합단백(rhPTP1B),진행매활성급억제제적실험.방법 중조체pGEX-hPTP1B전화E.coliDH5a,유도표체rhPTP1B병우화조건후,초성취세포렬해상청액경GST친화층석주순화후,이용rhPTP1B수해특이성저물4-초기분기린산이납염(pNPP-Na2)적린산기단이산생안색반응래측정rhPTP1B활성,병분석기여rhPTP1B농도、저물농도급반응온도적관계,범산납(Na3VO4)억제류형적연구,로응다총황동(TFLC)대rhPTP1B적억제성작용화농도의뢰관계.결과 rhPTP1B표체적최괄조건시재34℃화2.0 mmol/LIPTG하유도표체10 h,가피GST친화층석법분리순화:기활성수매농도급저물농도적증가이증가,35℃시rhPTP1B적활성최대;범산납적작용궤제가능위비경쟁성억제작용;TFLC대rhPTP1B유명현적억제작용.결론 유도표체순화적rhPTP1B융합단백가용우억제제적연구,TFLC대rhPT1B적강억제작용가능시기강저당뇨병대서혈당농도적궤제지일.
