江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
1期
131-134
,共4页
潘伟芹%于建宁%王公金%徐小波%于峰祥%李燕
潘偉芹%于建寧%王公金%徐小波%于峰祥%李燕
반위근%우건저%왕공금%서소파%우봉상%리연
SQR%pMG36e%乳酸菌%重组载体
SQR%pMG36e%乳痠菌%重組載體
SQR%pMG36e%유산균%중조재체
为了研究硫化物-醌氧化还原酶( SQR)基因的乳酸菌表达载体pMG36e-SQR-Myc的构建及其在大肠杆菌DH5a和乳酸菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e与目的片段SQR-Myc,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连接产物通过KCM法转化到大肠杆菌DH5a中,提取所得到阳性大肠杆菌菌株质粒pMG36e-SQR-Myc进行双酶切鉴定与普通PCR鉴定；并通过电转化将重组质粒导入乳酸菌MG1363中,采用SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测SQR蛋白质在其中的表达情况.结果显示,SQR乳酸菌重组表达载体pMG36e-SQR-Myc被成功构建,目的蛋白质SQR在大肠杆菌和乳酸菌MG1363中被成功检测到.因此,乳酸菌MG1363可以用来表达硫化物-醌氧化还原酶(SQR).
為瞭研究硫化物-醌氧化還原酶( SQR)基因的乳痠菌錶達載體pMG36e-SQR-Myc的構建及其在大腸桿菌DH5a和乳痠菌MG1363中的錶達,通過限製性內切酶酶切大腸桿菌-乳痠菌穿梭錶達載體pMG36e與目的片段SQR-Myc,迴收純化併用T4連接酶進行連接,連接產物通過KCM法轉化到大腸桿菌DH5a中,提取所得到暘性大腸桿菌菌株質粒pMG36e-SQR-Myc進行雙酶切鑒定與普通PCR鑒定；併通過電轉化將重組質粒導入乳痠菌MG1363中,採用SDS-PAGE電泳和Western-blotting檢測SQR蛋白質在其中的錶達情況.結果顯示,SQR乳痠菌重組錶達載體pMG36e-SQR-Myc被成功構建,目的蛋白質SQR在大腸桿菌和乳痠菌MG1363中被成功檢測到.因此,乳痠菌MG1363可以用來錶達硫化物-醌氧化還原酶(SQR).
위료연구류화물-곤양화환원매( SQR)기인적유산균표체재체pMG36e-SQR-Myc적구건급기재대장간균DH5a화유산균MG1363중적표체,통과한제성내절매매절대장간균-유산균천사표체재체pMG36e여목적편단SQR-Myc,회수순화병용T4련접매진행련접,련접산물통과KCM법전화도대장간균DH5a중,제취소득도양성대장간균균주질립pMG36e-SQR-Myc진행쌍매절감정여보통PCR감정；병통과전전화장중조질립도입유산균MG1363중,채용SDS-PAGE전영화Western-blotting검측SQR단백질재기중적표체정황.결과현시,SQR유산균중조표체재체pMG36e-SQR-Myc피성공구건,목적단백질SQR재대장간균화유산균MG1363중피성공검측도.인차,유산균MG1363가이용래표체류화물-곤양화환원매(SQR).
