CAJ | 학술논문

背景:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,在胃癌组织中高表达.目的:构建survivin基因短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并观察其对人胃癌细胞株BGC823和SGC7901中survivin 表达的影响.方法:根据GenBank中survivin基因序列设计并合成能转录shRNA的双链DNA序列,插入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因和U6启动子的真核表达载体pRNAT-U6.3中,构建重组载体pRNA-shSUR.重组载体经鉴定后转染胃癌细胞株BGC823和SGC7901,以转染pRNA-shControl作为阴性对照.荧光显微镜下观察转染情况,蛋白质印迹法检测survivin蛋白表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测胃癌细胞凋亡情况.结果:成功构建了针对survivin基因的shRNA表达载体.转染胃癌BGC823和SGC7901细胞48 h后,与阴性对照组相比,pRNA-shSUR组GFP表达增强,survivin蛋白表达受到明显抑制(P＜0.05),胃癌细胞早期凋亡率明显增加.结论:成功构建靶向survivin基因的特异性shRNA真核表达载体,转染胃癌细胞后可抑制survivin蛋白表达并促进细胞凋亡,为进一步研究survivin基因与胃癌生物学行为以及化疗耐药等的相关性奠定了基础.
배경:위암시아국최상견적악성종류지일,survivin시조망억제단백가족적신성원,재위암조직중고표체.목적:구건survivin기인단발협RNA(shRNA)진핵표체재체병관찰기대인위암세포주BGC823화SGC7901중survivin 표체적영향.방법:근거GenBank중survivin기인서렬설계병합성능전록shRNA적쌍련DNA서렬,삽입함유록색형광단백(GFP)기인화U6계동자적진핵표체재체pRNAT-U6.3중,구건중조재체pRNA-shSUR.중조재체경감정후전염위암세포주BGC823화SGC7901,이전염pRNA-shControl작위음성대조.형광현미경하관찰전염정황,단백질인적법검측survivin단백표체,Annexin V-FITC/PI쌍염법검측위암세포조망정황.결과:성공구건료침대survivin기인적shRNA표체재체.전염위암BGC823화SGC7901세포48 h후,여음성대조조상비,pRNA-shSUR조GFP표체증강,survivin단백표체수도명현억제(P＜0.05),위암세포조기조망솔명현증가.결론:성공구건파향survivin기인적특이성shRNA진핵표체재체,전염위암세포후가억제survivin단백표체병촉진세포조망,위진일보연구survivin기인여위암생물학행위이급화료내약등적상관성전정료기출.