中华创伤骨科杂志
中華創傷骨科雜誌
중화창상골과잡지
CHINESE JOURNAL OF ORTHOPAEDIC TRAUMA
2006年
9期
846-851
,共6页
张宁%胡志毅%殷国勇%范卫民%陶松年%王道新%董天华
張寧%鬍誌毅%慇國勇%範衛民%陶鬆年%王道新%董天華
장저%호지의%은국용%범위민%도송년%왕도신%동천화
G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1%细胞外调节激酶1/2%血小板衍生生长因子%成骨细胞迁移
G蛋白耦聯受體激酶結閤蛋白1%細胞外調節激酶1/2%血小闆衍生生長因子%成骨細胞遷移
G단백우련수체격매결합단백1%세포외조절격매1/2%혈소판연생생장인자%성골세포천이
目的 探索G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1(GIT1)在成骨细胞迁移中的作用,并分析其机理.方法 通过Western blot方法检测GIT1蛋白在鼠的成骨细胞内的表达;用免疫荧光染色方法确定:在血小板衍生生长因子(PDGF)不刺激和刺激的条件下,GIT1和细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)在成骨细胞内的位置;用共同免疫沉淀的方法测定GIT1和ERK1/2相互结合,并且用免疫荧光双染的方法确定这两种蛋白相互结合的位置;用包含GIT1-RNA发夹结构的腺病毒感染成骨细胞后,用免疫荧光染色方法确定磷酸化ERK1/2(pERK1/2)在成骨细胞内的位置,用划痕愈合法检测在PDGF刺激下的迁移能力.结果 在成骨细胞内,PDGF刺激导致了GIT1和ERK1/2的相互结合,并且这种结合发生在成骨细胞的局部粘附内.包含GIT1-RNA发夹结构的腺病毒明显抑制了pERK1/2招募至成骨细胞局部粘附内以及PDGF所刺激的成骨细胞的迁移.结论 在PDGF刺激下,GIT1招募pERK1/2至成骨细胞的局部粘附内,从而促进成骨细胞的迁移.
目的 探索G蛋白耦聯受體激酶結閤蛋白1(GIT1)在成骨細胞遷移中的作用,併分析其機理.方法 通過Western blot方法檢測GIT1蛋白在鼠的成骨細胞內的錶達;用免疫熒光染色方法確定:在血小闆衍生生長因子(PDGF)不刺激和刺激的條件下,GIT1和細胞外調節激酶1/2(ERK1/2)在成骨細胞內的位置;用共同免疫沉澱的方法測定GIT1和ERK1/2相互結閤,併且用免疫熒光雙染的方法確定這兩種蛋白相互結閤的位置;用包含GIT1-RNA髮夾結構的腺病毒感染成骨細胞後,用免疫熒光染色方法確定燐痠化ERK1/2(pERK1/2)在成骨細胞內的位置,用劃痕愈閤法檢測在PDGF刺激下的遷移能力.結果 在成骨細胞內,PDGF刺激導緻瞭GIT1和ERK1/2的相互結閤,併且這種結閤髮生在成骨細胞的跼部粘附內.包含GIT1-RNA髮夾結構的腺病毒明顯抑製瞭pERK1/2招募至成骨細胞跼部粘附內以及PDGF所刺激的成骨細胞的遷移.結論 在PDGF刺激下,GIT1招募pERK1/2至成骨細胞的跼部粘附內,從而促進成骨細胞的遷移.
목적 탐색G단백우련수체격매결합단백1(GIT1)재성골세포천이중적작용,병분석기궤리.방법 통과Western blot방법검측GIT1단백재서적성골세포내적표체;용면역형광염색방법학정:재혈소판연생생장인자(PDGF)불자격화자격적조건하,GIT1화세포외조절격매1/2(ERK1/2)재성골세포내적위치;용공동면역침정적방법측정GIT1화ERK1/2상호결합,병차용면역형광쌍염적방법학정저량충단백상호결합적위치;용포함GIT1-RNA발협결구적선병독감염성골세포후,용면역형광염색방법학정린산화ERK1/2(pERK1/2)재성골세포내적위치,용화흔유합법검측재PDGF자격하적천이능력.결과 재성골세포내,PDGF자격도치료GIT1화ERK1/2적상호결합,병차저충결합발생재성골세포적국부점부내.포함GIT1-RNA발협결구적선병독명현억제료pERK1/2초모지성골세포국부점부내이급PDGF소자격적성골세포적천이.결론 재PDGF자격하,GIT1초모pERK1/2지성골세포적국부점부내,종이촉진성골세포적천이.
