中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2005年
1期
22-24
,共3页
张胜权%陈兵%罗欣%徐从贞%鲁云霞
張勝權%陳兵%囉訢%徐從貞%魯雲霞
장성권%진병%라흔%서종정%로운하
白细胞介素21%克隆表达%T细胞增殖
白細胞介素21%剋隆錶達%T細胞增殖
백세포개소21%극륭표체%T세포증식
目的:构建人细胞因子IL-21表达载体并在Hela细胞中稳定表达,分析rhIL-21体外促T细胞增殖作用.方法:以已构建的pMD-IL21为模板,PCR扩增成熟IL-21 cDNA的编码框序列并构建到真核表达载体pCDNA3.1/hismyc-B中.挑出阳性克隆进行扩增,脂质体转染入Hela细胞中并以G418加压筛选.有限稀释法、RT-PCR及Western blot筛选出稳定表达的细胞株.培养上清液经金属离子螯合层析分离纯化后,SDS-PAGE、Western blot鉴定.MTT法测定其与抗CD3单克隆抗体共刺激T细胞增殖活性.结果:SDS-PAGE、Western blot显示Mr为18 000的带有myc重组人IL-21融合蛋白(rhIL-21);并成功地获得hIL21稳定表达细胞株.rhIL-21融合蛋白具有与抗CD3抗体共刺激T细胞增殖作用.结论:获得具有生物学活性的rhIL-21细胞因子,为进一步研究其功能奠定基础.
目的:構建人細胞因子IL-21錶達載體併在Hela細胞中穩定錶達,分析rhIL-21體外促T細胞增殖作用.方法:以已構建的pMD-IL21為模闆,PCR擴增成熟IL-21 cDNA的編碼框序列併構建到真覈錶達載體pCDNA3.1/hismyc-B中.挑齣暘性剋隆進行擴增,脂質體轉染入Hela細胞中併以G418加壓篩選.有限稀釋法、RT-PCR及Western blot篩選齣穩定錶達的細胞株.培養上清液經金屬離子螯閤層析分離純化後,SDS-PAGE、Western blot鑒定.MTT法測定其與抗CD3單剋隆抗體共刺激T細胞增殖活性.結果:SDS-PAGE、Western blot顯示Mr為18 000的帶有myc重組人IL-21融閤蛋白(rhIL-21);併成功地穫得hIL21穩定錶達細胞株.rhIL-21融閤蛋白具有與抗CD3抗體共刺激T細胞增殖作用.結論:穫得具有生物學活性的rhIL-21細胞因子,為進一步研究其功能奠定基礎.
목적:구건인세포인자IL-21표체재체병재Hela세포중은정표체,분석rhIL-21체외촉T세포증식작용.방법:이이구건적pMD-IL21위모판,PCR확증성숙IL-21 cDNA적편마광서렬병구건도진핵표체재체pCDNA3.1/hismyc-B중.도출양성극륭진행확증,지질체전염입Hela세포중병이G418가압사선.유한희석법、RT-PCR급Western blot사선출은정표체적세포주.배양상청액경금속리자오합층석분리순화후,SDS-PAGE、Western blot감정.MTT법측정기여항CD3단극륭항체공자격T세포증식활성.결과:SDS-PAGE、Western blot현시Mr위18 000적대유myc중조인IL-21융합단백(rhIL-21);병성공지획득hIL21은정표체세포주.rhIL-21융합단백구유여항CD3항체공자격T세포증식작용.결론:획득구유생물학활성적rhIL-21세포인자,위진일보연구기공능전정기출.
