药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2006年
4期
265-270
,共6页
孙雄华%廖建民%孙石静%张新元%徐寒梅%沈子龙
孫雄華%廖建民%孫石靜%張新元%徐寒梅%瀋子龍
손웅화%료건민%손석정%장신원%서한매%침자룡
海带%瑞替普酶%鉴定
海帶%瑞替普酶%鑒定
해대%서체보매%감정
为验证本实验室构建的瑞替普酶(reteplase,r-PA)基因是否成功转入海带,本文通过FAPA、PCR、Southern blotting和Western blotting等方法分别从体外纤溶活性、DNA的整合以及目的蛋白的表达等三个方面进行鉴定,并运用固定化金属离子亲和层析对表达的蛋白进行了初步分离纯化.FAPA结果表明转基因海带蛋白具有溶栓活性,PCR和Southern Blotting显示在1 100 bp处有特异性条带,Western blotting在39 ku处有蛋白条带,证明r-PA基因已成功转入海带而且获得稳定表达,海带中表达的r-PA不需复性就具有溶栓活性,同时说明在r-PA N端设计的(His)6有助于我们利用亲和层析分离纯化目的蛋白.
為驗證本實驗室構建的瑞替普酶(reteplase,r-PA)基因是否成功轉入海帶,本文通過FAPA、PCR、Southern blotting和Western blotting等方法分彆從體外纖溶活性、DNA的整閤以及目的蛋白的錶達等三箇方麵進行鑒定,併運用固定化金屬離子親和層析對錶達的蛋白進行瞭初步分離純化.FAPA結果錶明轉基因海帶蛋白具有溶栓活性,PCR和Southern Blotting顯示在1 100 bp處有特異性條帶,Western blotting在39 ku處有蛋白條帶,證明r-PA基因已成功轉入海帶而且穫得穩定錶達,海帶中錶達的r-PA不需複性就具有溶栓活性,同時說明在r-PA N耑設計的(His)6有助于我們利用親和層析分離純化目的蛋白.
위험증본실험실구건적서체보매(reteplase,r-PA)기인시부성공전입해대,본문통과FAPA、PCR、Southern blotting화Western blotting등방법분별종체외섬용활성、DNA적정합이급목적단백적표체등삼개방면진행감정,병운용고정화금속리자친화층석대표체적단백진행료초보분리순화.FAPA결과표명전기인해대단백구유용전활성,PCR화Southern Blotting현시재1 100 bp처유특이성조대,Western blotting재39 ku처유단백조대,증명r-PA기인이성공전입해대이차획득은정표체,해대중표체적r-PA불수복성취구유용전활성,동시설명재r-PA N단설계적(His)6유조우아문이용친화층석분리순화목적단백.
