解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2006年
8期
745-748
,共4页
胡玉洋%杨银辉%刘洪%康晓平%朱晓光%司炳银%祝庆余
鬍玉洋%楊銀輝%劉洪%康曉平%硃曉光%司炳銀%祝慶餘
호옥양%양은휘%류홍%강효평%주효광%사병은%축경여
脑炎病毒亚组,蜱传%实时定量PCR%TaqMan
腦炎病毒亞組,蜱傳%實時定量PCR%TaqMan
뇌염병독아조,비전%실시정량PCR%TaqMan
目的 建立快速检测TBEV的实时定量TaqMan PCR方法 .方法 根据GenBank发表的TBEV全基因组序列资料,在其C基因和NS5基因区段设计TBEV的特异探针和引物,在E基因区段设计普通PCR引物.以MDJ01株作为待检毒株,黄病毒属的另外7株病毒用来评价检测体系的特异性.测定病毒的TCID50值并制备病毒拷贝数标准品,分别用于制作病毒滴度和拷贝数标准曲线.与常规PCR方法进行了灵敏度比较,并建立了病毒感染小鼠的检测模型.结果 该检测方法的灵敏度可达到100拷贝/反应或0.1 TCID50,是常规PCR方法的十倍.作为对照的黄热病毒疫苗株17D、登革1～4型病毒、日本脑炎病毒、西尼罗病毒Chin-01株结果均为阴性,证明该体系具有良好的特异性.经过多批次、不同浓度样品的重复检测,批内和批间变异系数均小于5%,表明该体系具有较好的稳定性和重复性.结论建立了一种灵敏、特异、简便易行的TBEV的TaqMan实时定量PCR检测方法 ,为TBEV的预防控制和诊断提供了一种技术手段.
目的 建立快速檢測TBEV的實時定量TaqMan PCR方法 .方法 根據GenBank髮錶的TBEV全基因組序列資料,在其C基因和NS5基因區段設計TBEV的特異探針和引物,在E基因區段設計普通PCR引物.以MDJ01株作為待檢毒株,黃病毒屬的另外7株病毒用來評價檢測體繫的特異性.測定病毒的TCID50值併製備病毒拷貝數標準品,分彆用于製作病毒滴度和拷貝數標準麯線.與常規PCR方法進行瞭靈敏度比較,併建立瞭病毒感染小鼠的檢測模型.結果 該檢測方法的靈敏度可達到100拷貝/反應或0.1 TCID50,是常規PCR方法的十倍.作為對照的黃熱病毒疫苗株17D、登革1～4型病毒、日本腦炎病毒、西尼囉病毒Chin-01株結果均為陰性,證明該體繫具有良好的特異性.經過多批次、不同濃度樣品的重複檢測,批內和批間變異繫數均小于5%,錶明該體繫具有較好的穩定性和重複性.結論建立瞭一種靈敏、特異、簡便易行的TBEV的TaqMan實時定量PCR檢測方法 ,為TBEV的預防控製和診斷提供瞭一種技術手段.
목적 건립쾌속검측TBEV적실시정량TaqMan PCR방법 .방법 근거GenBank발표적TBEV전기인조서렬자료,재기C기인화NS5기인구단설계TBEV적특이탐침화인물,재E기인구단설계보통PCR인물.이MDJ01주작위대검독주,황병독속적령외7주병독용래평개검측체계적특이성.측정병독적TCID50치병제비병독고패수표준품,분별용우제작병독적도화고패수표준곡선.여상규PCR방법진행료령민도비교,병건립료병독감염소서적검측모형.결과 해검측방법적령민도가체도100고패/반응혹0.1 TCID50,시상규PCR방법적십배.작위대조적황열병독역묘주17D、등혁1～4형병독、일본뇌염병독、서니라병독Chin-01주결과균위음성,증명해체계구유량호적특이성.경과다비차、불동농도양품적중복검측,비내화비간변이계수균소우5%,표명해체계구유교호적은정성화중복성.결론건립료일충령민、특이、간편역행적TBEV적TaqMan실시정량PCR검측방법 ,위TBEV적예방공제화진단제공료일충기술수단.
