中国比较医学杂志
中國比較醫學雜誌
중국비교의학잡지
CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
2008年
7期
16-19
,共4页
结核分枝杆菌%早期分泌性抗原靶ESAT-6%载体构建%融合表达
結覈分枝桿菌%早期分泌性抗原靶ESAT-6%載體構建%融閤錶達
결핵분지간균%조기분비성항원파ESAT-6%재체구건%융합표체
目的 构建致病性结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶(Early secretary antigenic target, ESAT-6)基因的pET原核表达载体,诱导表达并初步鉴定该蛋白.方法 设计特异性引物,用PCR方法从结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组中扩增ESAT-6基因,产物通过双酶切克隆入pET-32a(+)质粒,经PCR、酶切、测序等方法鉴定后,转入大肠杆菌BL21菌体中IPTG诱导表达,并经镍柱纯化、Western-blotting鉴定.结果 所获得ESAT-6基因序列与GenBank公布的完全一致;表达融合蛋白相对分子质量约2.5×104,并能与特异性单抗结合,具有一定免疫学活性.结论成功表达纯化并鉴定构建了ESAT-6融合蛋白.
目的 構建緻病性結覈分枝桿菌早期分泌性抗原靶(Early secretary antigenic target, ESAT-6)基因的pET原覈錶達載體,誘導錶達併初步鑒定該蛋白.方法 設計特異性引物,用PCR方法從結覈分枝桿菌標準株H37Rv基因組中擴增ESAT-6基因,產物通過雙酶切剋隆入pET-32a(+)質粒,經PCR、酶切、測序等方法鑒定後,轉入大腸桿菌BL21菌體中IPTG誘導錶達,併經鎳柱純化、Western-blotting鑒定.結果 所穫得ESAT-6基因序列與GenBank公佈的完全一緻;錶達融閤蛋白相對分子質量約2.5×104,併能與特異性單抗結閤,具有一定免疫學活性.結論成功錶達純化併鑒定構建瞭ESAT-6融閤蛋白.
목적 구건치병성결핵분지간균조기분비성항원파(Early secretary antigenic target, ESAT-6)기인적pET원핵표체재체,유도표체병초보감정해단백.방법 설계특이성인물,용PCR방법종결핵분지간균표준주H37Rv기인조중확증ESAT-6기인,산물통과쌍매절극륭입pET-32a(+)질립,경PCR、매절、측서등방법감정후,전입대장간균BL21균체중IPTG유도표체,병경얼주순화、Western-blotting감정.결과 소획득ESAT-6기인서렬여GenBank공포적완전일치;표체융합단백상대분자질량약2.5×104,병능여특이성단항결합,구유일정면역학활성.결론성공표체순화병감정구건료ESAT-6융합단백.
