生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2012年
3期
337-341
,共5页
杜吉超%王静雪%王娅莎%习佳飞%曾泉%周军年%岳文%裴雪涛
杜吉超%王靜雪%王婭莎%習佳飛%曾泉%週軍年%嶽文%裴雪濤
두길초%왕정설%왕아사%습가비%증천%주군년%악문%배설도
人胚胎干细胞%微小RNA%miR-125b%细胞增殖
人胚胎榦細胞%微小RNA%miR-125b%細胞增殖
인배태간세포%미소RNA%miR-125b%세포증식
目的:通过在人胚胎干细胞(hESC)中有效转染微小RNA miR-125b的真核表达载体,研究过表达miR-125b对hESC增殖的影响.方法:将在无饲养层上培养至第3d,克隆融合达70％的hESC用Accutase酶消化为单细胞,然后用LipofectAMINE2000对hESC单细胞转染pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP载体及其对照pHRS-1cla-CMV-EGFP载体,通过实时定量PCR对转染后细胞中成熟miR-125b的表达进行检测；进一步进行细胞计数和克隆计数,对miR-125b表达上调的hESC的增殖情况进行分析.结果:实时定量PCR检测结果表明,细胞转染后72 h,miR-125b的表达上调1.45倍,说明hESC转染成功；克隆计数及细胞计数结果显示过表达miR-125b的hESC增殖受到明显抑制(P＜001).结论:转染miR-125b真核表达载体的hESC能够上调成熟miR-125b的表达,hESC中miR-125b的表达上调能明显抑制hESC的增殖.
目的:通過在人胚胎榦細胞(hESC)中有效轉染微小RNA miR-125b的真覈錶達載體,研究過錶達miR-125b對hESC增殖的影響.方法:將在無飼養層上培養至第3d,剋隆融閤達70％的hESC用Accutase酶消化為單細胞,然後用LipofectAMINE2000對hESC單細胞轉染pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP載體及其對照pHRS-1cla-CMV-EGFP載體,通過實時定量PCR對轉染後細胞中成熟miR-125b的錶達進行檢測；進一步進行細胞計數和剋隆計數,對miR-125b錶達上調的hESC的增殖情況進行分析.結果:實時定量PCR檢測結果錶明,細胞轉染後72 h,miR-125b的錶達上調1.45倍,說明hESC轉染成功；剋隆計數及細胞計數結果顯示過錶達miR-125b的hESC增殖受到明顯抑製(P＜001).結論:轉染miR-125b真覈錶達載體的hESC能夠上調成熟miR-125b的錶達,hESC中miR-125b的錶達上調能明顯抑製hESC的增殖.
목적:통과재인배태간세포(hESC)중유효전염미소RNA miR-125b적진핵표체재체,연구과표체miR-125b대hESC증식적영향.방법:장재무사양층상배양지제3d,극륭융합체70％적hESC용Accutase매소화위단세포,연후용LipofectAMINE2000대hESC단세포전염pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP재체급기대조pHRS-1cla-CMV-EGFP재체,통과실시정량PCR대전염후세포중성숙miR-125b적표체진행검측；진일보진행세포계수화극륭계수,대miR-125b표체상조적hESC적증식정황진행분석.결과:실시정량PCR검측결과표명,세포전염후72 h,miR-125b적표체상조1.45배,설명hESC전염성공；극륭계수급세포계수결과현시과표체miR-125b적hESC증식수도명현억제(P＜001).결론:전염miR-125b진핵표체재체적hESC능구상조성숙miR-125b적표체,hESC중miR-125b적표체상조능명현억제hESC적증식.
