中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
20期
3773-3778
,共6页
丛树艳%张威%王亚%邵华%冯娟
叢樹豔%張威%王亞%邵華%馮娟
총수염%장위%왕아%소화%풍연
亨廷顿舞蹈病%CREB结合蛋白%蛋白酶体抑制剂%变异亨廷顿蛋白%组蛋白乙酰化酶
亨廷頓舞蹈病%CREB結閤蛋白%蛋白酶體抑製劑%變異亨廷頓蛋白%組蛋白乙酰化酶
형정돈무도병%CREB결합단백%단백매체억제제%변이형정돈단백%조단백을선화매
背景:目前针对转录因子CBP在亨廷顿舞蹈病发病机制中作用的研究主要集中在包涵体形成对CBP的抑制作用.目的:在亨廷顿舞蹈病细胞模型中,探讨变异亨廷顿蛋白对CBP组蛋白乙酰基转移酶活性及CBP蛋白表达的影响.方法:运用可经多西环素诱导表达绿色荧光蛋白标记的HD第一外显子片段含有23个(正常)或74个(变异)多聚谷氨酰胺片段(N-htt-Q23或-Q74)的大鼠肾上腺神经嗜铬细胞瘤PC12细胞模型,用免疫荧光显微镜观察细胞内变异亨廷顿蛋白表达,用免疫沉淀后的内源性CBP进行组蛋白H4乙酰化测定,Western blot检测CBP蛋白水平,通过外源性加入特异性蛋白酶体抑制剂MG-132,观察其对CBP蛋白水平的影响.用Lightcycler PCR检测CBP mRNA转录水平.结果与结论:多西环素诱导1 d时,N-htt-Q74只在少数细胞中形成包涵体,6 d时大部分细胞含有包涵体(>90%),而N-htt-Q23始终不形成蛋白包涵体.变异亨廷顿蛋白可抑制CBP组蛋白乙酰基转移酶活性及内源性CBP蛋白水平,但不影响CBP mRNA的转录水平.在表达N-htt-Q74细胞中,MG-132可通过影响蛋白降解部分恢复CBP蛋白水平.结果提示,除了变异亨廷顿蛋白包涵体,可溶性变异亨廷顿蛋白在早期已经开始抑制CBP组蛋白乙酰基转移酶活性和降低CBP蛋白水平,在亨廷顿舞蹈病发病的分子机制中起重要作用.
揹景:目前針對轉錄因子CBP在亨廷頓舞蹈病髮病機製中作用的研究主要集中在包涵體形成對CBP的抑製作用.目的:在亨廷頓舞蹈病細胞模型中,探討變異亨廷頓蛋白對CBP組蛋白乙酰基轉移酶活性及CBP蛋白錶達的影響.方法:運用可經多西環素誘導錶達綠色熒光蛋白標記的HD第一外顯子片段含有23箇(正常)或74箇(變異)多聚穀氨酰胺片段(N-htt-Q23或-Q74)的大鼠腎上腺神經嗜鉻細胞瘤PC12細胞模型,用免疫熒光顯微鏡觀察細胞內變異亨廷頓蛋白錶達,用免疫沉澱後的內源性CBP進行組蛋白H4乙酰化測定,Western blot檢測CBP蛋白水平,通過外源性加入特異性蛋白酶體抑製劑MG-132,觀察其對CBP蛋白水平的影響.用Lightcycler PCR檢測CBP mRNA轉錄水平.結果與結論:多西環素誘導1 d時,N-htt-Q74隻在少數細胞中形成包涵體,6 d時大部分細胞含有包涵體(>90%),而N-htt-Q23始終不形成蛋白包涵體.變異亨廷頓蛋白可抑製CBP組蛋白乙酰基轉移酶活性及內源性CBP蛋白水平,但不影響CBP mRNA的轉錄水平.在錶達N-htt-Q74細胞中,MG-132可通過影響蛋白降解部分恢複CBP蛋白水平.結果提示,除瞭變異亨廷頓蛋白包涵體,可溶性變異亨廷頓蛋白在早期已經開始抑製CBP組蛋白乙酰基轉移酶活性和降低CBP蛋白水平,在亨廷頓舞蹈病髮病的分子機製中起重要作用.
배경:목전침대전록인자CBP재형정돈무도병발병궤제중작용적연구주요집중재포함체형성대CBP적억제작용.목적:재형정돈무도병세포모형중,탐토변이형정돈단백대CBP조단백을선기전이매활성급CBP단백표체적영향.방법:운용가경다서배소유도표체록색형광단백표기적HD제일외현자편단함유23개(정상)혹74개(변이)다취곡안선알편단(N-htt-Q23혹-Q74)적대서신상선신경기락세포류PC12세포모형,용면역형광현미경관찰세포내변이형정돈단백표체,용면역침정후적내원성CBP진행조단백H4을선화측정,Western blot검측CBP단백수평,통과외원성가입특이성단백매체억제제MG-132,관찰기대CBP단백수평적영향.용Lightcycler PCR검측CBP mRNA전록수평.결과여결론:다서배소유도1 d시,N-htt-Q74지재소수세포중형성포함체,6 d시대부분세포함유포함체(>90%),이N-htt-Q23시종불형성단백포함체.변이형정돈단백가억제CBP조단백을선기전이매활성급내원성CBP단백수평,단불영향CBP mRNA적전록수평.재표체N-htt-Q74세포중,MG-132가통과영향단백강해부분회복CBP단백수평.결과제시,제료변이형정돈단백포함체,가용성변이형정돈단백재조기이경개시억제CBP조단백을선기전이매활성화강저CBP단백수평,재형정돈무도병발병적분자궤제중기중요작용.