细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
1期
67-70
,共4页
唐彩华%肖锡宾%吴涛%梁昌盛%刘长征
唐綵華%肖錫賓%吳濤%樑昌盛%劉長徵
당채화%초석빈%오도%량창성%류장정
包涵体%单链抗体%复性%鼻咽癌
包涵體%單鏈抗體%複性%鼻嚥癌
포함체%단련항체%복성%비인암
目的:探讨以包涵体形式表达的抗鼻咽癌单克隆抗体(mAb)BAC5的单链抗体(BAC5-scFv)的纯化、复性方法,并对其活性进行检测.方法:扩增pET-22b-scFv质粒转化的大肠杆菌BL21(DE3)菌株,培养、破菌后,分离和变性包涵体,用Ni-NTA His Bind层析柱纯化变性的scFv.经稀释、透析及尿素梯度凝胶层析柱3种方法进行复性.用细胞免疫组化染色和蛋白印迹法(Western blot),鉴定复性后的BAC5-scFv的免疫活性.结果:Ni-NTA His Bind亲和层析柱能有效纯化变性的scFv.以尿素梯度凝胶层析柱复性的蛋白回收率最高.免疫细胞化学染色法检测及Western blot分析证实,复性后的BAC5-scFv可与CNE2细胞上的抗原特异性结合.结论:以包涵体形式表达的BAC5-scFv经变性、纯化及复性后,获得良好的免疫活性,为大量制备具有活性的BAC5-scFv,并用于鼻咽癌的放射免疫显像和治疗研究奠定了基础.
目的:探討以包涵體形式錶達的抗鼻嚥癌單剋隆抗體(mAb)BAC5的單鏈抗體(BAC5-scFv)的純化、複性方法,併對其活性進行檢測.方法:擴增pET-22b-scFv質粒轉化的大腸桿菌BL21(DE3)菌株,培養、破菌後,分離和變性包涵體,用Ni-NTA His Bind層析柱純化變性的scFv.經稀釋、透析及尿素梯度凝膠層析柱3種方法進行複性.用細胞免疫組化染色和蛋白印跡法(Western blot),鑒定複性後的BAC5-scFv的免疫活性.結果:Ni-NTA His Bind親和層析柱能有效純化變性的scFv.以尿素梯度凝膠層析柱複性的蛋白迴收率最高.免疫細胞化學染色法檢測及Western blot分析證實,複性後的BAC5-scFv可與CNE2細胞上的抗原特異性結閤.結論:以包涵體形式錶達的BAC5-scFv經變性、純化及複性後,穫得良好的免疫活性,為大量製備具有活性的BAC5-scFv,併用于鼻嚥癌的放射免疫顯像和治療研究奠定瞭基礎.
목적:탐토이포함체형식표체적항비인암단극륭항체(mAb)BAC5적단련항체(BAC5-scFv)적순화、복성방법,병대기활성진행검측.방법:확증pET-22b-scFv질립전화적대장간균BL21(DE3)균주,배양、파균후,분리화변성포함체,용Ni-NTA His Bind층석주순화변성적scFv.경희석、투석급뇨소제도응효층석주3충방법진행복성.용세포면역조화염색화단백인적법(Western blot),감정복성후적BAC5-scFv적면역활성.결과:Ni-NTA His Bind친화층석주능유효순화변성적scFv.이뇨소제도응효층석주복성적단백회수솔최고.면역세포화학염색법검측급Western blot분석증실,복성후적BAC5-scFv가여CNE2세포상적항원특이성결합.결론:이포함체형식표체적BAC5-scFv경변성、순화급복성후,획득량호적면역활성,위대량제비구유활성적BAC5-scFv,병용우비인암적방사면역현상화치료연구전정료기출.
