中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2007年
2期
150-154
,共5页
吴国平%郭川%曹敏杰%刘冰心%梁银龙%苏文金
吳國平%郭川%曹敏傑%劉冰心%樑銀龍%囌文金
오국평%곽천%조민걸%류빙심%량은룡%소문금
猪繁殖与呼吸综合征病毒%核衣壳蛋白%同源二聚体%间接ELISA
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%覈衣殼蛋白%同源二聚體%間接ELISA
저번식여호흡종합정병독%핵의각단백%동원이취체%간접ELISA
从已构建的PRRSV ORF7重组质粒pUCm-T-ORF7中用PCR扩增ORF7基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-ORF7并转化大肠杆菌.经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,成功表达了谷胱苷肽转移酶(GST)融合的核衣壳蛋白(N),重组N蛋白表达量约为菌体总蛋白的35%,主要以可溶的形式存在,且能形成同源二聚体.重组N蛋白经谷胱苷肽凝胶(glutathione sepharose 4B)亲和层析后得到高度纯化,并将该蛋白作为抗原建立了间接ELISA检测方法.利用该方法对某猪场76份猪血清进行检测并将结果与IDEXX公司ELISA试剂盒检测结果作比较,2种方法的总符合率达93.4%,检测结果之间差异不显著(P＞0.05).结果表明大肠杆菌表达的重组GST融合N蛋白具有良好的抗原性,因而有望利用该重组蛋白开发为试剂盒应用于临床PRRSV抗体的检测.
從已構建的PRRSV ORF7重組質粒pUCm-T-ORF7中用PCR擴增ORF7基因亞剋隆至錶達載體pGEX-4T-3,構建重組錶達質粒pGEX-4T-3-ORF7併轉化大腸桿菌.經SDS-PAGE及Western blotting鑒定,成功錶達瞭穀胱苷肽轉移酶(GST)融閤的覈衣殼蛋白(N),重組N蛋白錶達量約為菌體總蛋白的35%,主要以可溶的形式存在,且能形成同源二聚體.重組N蛋白經穀胱苷肽凝膠(glutathione sepharose 4B)親和層析後得到高度純化,併將該蛋白作為抗原建立瞭間接ELISA檢測方法.利用該方法對某豬場76份豬血清進行檢測併將結果與IDEXX公司ELISA試劑盒檢測結果作比較,2種方法的總符閤率達93.4%,檢測結果之間差異不顯著(P＞0.05).結果錶明大腸桿菌錶達的重組GST融閤N蛋白具有良好的抗原性,因而有望利用該重組蛋白開髮為試劑盒應用于臨床PRRSV抗體的檢測.
종이구건적PRRSV ORF7중조질립pUCm-T-ORF7중용PCR확증ORF7기인아극륭지표체재체pGEX-4T-3,구건중조표체질립pGEX-4T-3-ORF7병전화대장간균.경SDS-PAGE급Western blotting감정,성공표체료곡광감태전이매(GST)융합적핵의각단백(N),중조N단백표체량약위균체총단백적35%,주요이가용적형식존재,차능형성동원이취체.중조N단백경곡광감태응효(glutathione sepharose 4B)친화층석후득도고도순화,병장해단백작위항원건립료간접ELISA검측방법.이용해방법대모저장76빈저혈청진행검측병장결과여IDEXX공사ELISA시제합검측결과작비교,2충방법적총부합솔체93.4%,검측결과지간차이불현저(P＞0.05).결과표명대장간균표체적중조GST융합N단백구유량호적항원성,인이유망이용해중조단백개발위시제합응용우림상PRRSV항체적검측.
