中国病原生物学杂志
中國病原生物學雜誌
중국병원생물학잡지
JOURNAL OF PATHOGEN BIOLOGY
2007年
6期
413-416
,共4页
高世同%张仁利%刘会娟%秦莉%耿艺介%黄达娜%吴少庭
高世同%張仁利%劉會娟%秦莉%耿藝介%黃達娜%吳少庭
고세동%장인리%류회연%진리%경예개%황체나%오소정
金黄色葡萄球菌%肠毒素B%克隆和表达
金黃色葡萄毬菌%腸毒素B%剋隆和錶達
금황색포도구균%장독소B%극륭화표체
目的 亚克隆金葡菌野生株S407030肠毒素B(SEB)基因,并在大肠埃希菌(E.coli)中表达,以获得重组SEB(Rseb)蛋白.方法 将含有SEB基因的质粒Pmd-18T/SEB双酶切获得目的片段,插入表达载体Pgex-4T-2中构建重组子Pgex-4T-2/SEB,并转化E.coli JM109感受态菌,阳性克隆以双酶切和PCR法鉴定;含重组质粒的工程菌以IPTG诱导表达Rseb蛋白;表达产物进行SDS-PAGE分析,并采用B-PER GST融合蛋白试剂盒纯化重组Rseb,Western blot鉴定其免疫反应性.结果 重组质粒经双酶切和PCR扩增鉴定均获得约705 bp的基因片段,与预期结果相一致;诱导表达的含GST的融合重组Rseb蛋白分子质量单位约为53 ku,纯化后作SDS-PAGE电泳显示一条蛋白带,Western blot显示Rseb能够被兔抗SEB抗体识别.结论 金葡菌野生株SEB在大肠埃希氏菌中得到有效表达,并获得电泳级纯度的重组Rseb,重组蛋白具有一定的免疫活性,为进一步研究其生物毒性与开发诊断试剂提供了生物材料.
目的 亞剋隆金葡菌野生株S407030腸毒素B(SEB)基因,併在大腸埃希菌(E.coli)中錶達,以穫得重組SEB(Rseb)蛋白.方法 將含有SEB基因的質粒Pmd-18T/SEB雙酶切穫得目的片段,插入錶達載體Pgex-4T-2中構建重組子Pgex-4T-2/SEB,併轉化E.coli JM109感受態菌,暘性剋隆以雙酶切和PCR法鑒定;含重組質粒的工程菌以IPTG誘導錶達Rseb蛋白;錶達產物進行SDS-PAGE分析,併採用B-PER GST融閤蛋白試劑盒純化重組Rseb,Western blot鑒定其免疫反應性.結果 重組質粒經雙酶切和PCR擴增鑒定均穫得約705 bp的基因片段,與預期結果相一緻;誘導錶達的含GST的融閤重組Rseb蛋白分子質量單位約為53 ku,純化後作SDS-PAGE電泳顯示一條蛋白帶,Western blot顯示Rseb能夠被兔抗SEB抗體識彆.結論 金葡菌野生株SEB在大腸埃希氏菌中得到有效錶達,併穫得電泳級純度的重組Rseb,重組蛋白具有一定的免疫活性,為進一步研究其生物毒性與開髮診斷試劑提供瞭生物材料.
목적 아극륭금포균야생주S407030장독소B(SEB)기인,병재대장애희균(E.coli)중표체,이획득중조SEB(Rseb)단백.방법 장함유SEB기인적질립Pmd-18T/SEB쌍매절획득목적편단,삽입표체재체Pgex-4T-2중구건중조자Pgex-4T-2/SEB,병전화E.coli JM109감수태균,양성극륭이쌍매절화PCR법감정;함중조질립적공정균이IPTG유도표체Rseb단백;표체산물진행SDS-PAGE분석,병채용B-PER GST융합단백시제합순화중조Rseb,Western blot감정기면역반응성.결과 중조질립경쌍매절화PCR확증감정균획득약705 bp적기인편단,여예기결과상일치;유도표체적함GST적융합중조Rseb단백분자질량단위약위53 ku,순화후작SDS-PAGE전영현시일조단백대,Western blot현시Rseb능구피토항SEB항체식별.결론 금포균야생주SEB재대장애희씨균중득도유효표체,병획득전영급순도적중조Rseb,중조단백구유일정적면역활성,위진일보연구기생물독성여개발진단시제제공료생물재료.
