农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2008年
5期
798-803
,共6页
贾淑玲%刘利杰%彭树英%何玉龙%何小宁%张涌
賈淑玲%劉利傑%彭樹英%何玉龍%何小寧%張湧
가숙령%류리걸%팽수영%하옥룡%하소저%장용
牛皮肤成纤维细胞%溶菌酶%基因转染%脂质体%绿色荧光蛋白
牛皮膚成纖維細胞%溶菌酶%基因轉染%脂質體%綠色熒光蛋白
우피부성섬유세포%용균매%기인전염%지질체%록색형광단백
为了为核移植法制作转人溶菌酶基因克隆牛提供供体细胞,研究体外分离培养牛皮肤成纤维细胞并进行了人溶菌酶基因转染.首先采用组织块贴壁法分离培养牛耳成纤维细胞,经传代纯化后,脂质法将含有双重筛选标记的人溶菌酶乳腺特异性表达载体转入体外培养的第4代牛皮肤成纤维细胞,500 μg/mLG418筛选2周,G418减半继续培养2~3代,然后对转染筛选后的细胞进行PCR检测及核型分析.结果表明,转染24 h后荧光显微镜下检测到有绿色荧光蛋白表达,传至15代的细胞核型正常,含有正常牛的二倍体核型(60,XX),PCR检测得到大约850bp的片段.说明目的基因已成功导人并表达.研究所获得的转基因牛耳成纤维细胞整合并表达了外源基因,同时保持了遗传稳定性,可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛研究.
為瞭為覈移植法製作轉人溶菌酶基因剋隆牛提供供體細胞,研究體外分離培養牛皮膚成纖維細胞併進行瞭人溶菌酶基因轉染.首先採用組織塊貼壁法分離培養牛耳成纖維細胞,經傳代純化後,脂質法將含有雙重篩選標記的人溶菌酶乳腺特異性錶達載體轉入體外培養的第4代牛皮膚成纖維細胞,500 μg/mLG418篩選2週,G418減半繼續培養2~3代,然後對轉染篩選後的細胞進行PCR檢測及覈型分析.結果錶明,轉染24 h後熒光顯微鏡下檢測到有綠色熒光蛋白錶達,傳至15代的細胞覈型正常,含有正常牛的二倍體覈型(60,XX),PCR檢測得到大約850bp的片段.說明目的基因已成功導人併錶達.研究所穫得的轉基因牛耳成纖維細胞整閤併錶達瞭外源基因,同時保持瞭遺傳穩定性,可作為體細胞覈移植的供體細胞進行轉基因剋隆牛研究.
위료위핵이식법제작전인용균매기인극륭우제공공체세포,연구체외분리배양우피부성섬유세포병진행료인용균매기인전염.수선채용조직괴첩벽법분리배양우이성섬유세포,경전대순화후,지질법장함유쌍중사선표기적인용균매유선특이성표체재체전입체외배양적제4대우피부성섬유세포,500 μg/mLG418사선2주,G418감반계속배양2~3대,연후대전염사선후적세포진행PCR검측급핵형분석.결과표명,전염24 h후형광현미경하검측도유록색형광단백표체,전지15대적세포핵형정상,함유정상우적이배체핵형(60,XX),PCR검측득도대약850bp적편단.설명목적기인이성공도인병표체.연구소획득적전기인우이성섬유세포정합병표체료외원기인,동시보지료유전은정성,가작위체세포핵이식적공체세포진행전기인극륭우연구.