CAJ | 학술논문

为了为核移植法制作转人溶菌酶基因克隆牛提供供体细胞,研究体外分离培养牛皮肤成纤维细胞并进行了人溶菌酶基因转染.首先采用组织块贴壁法分离培养牛耳成纤维细胞,经传代纯化后,脂质法将含有双重筛选标记的人溶菌酶乳腺特异性表达载体转入体外培养的第4代牛皮肤成纤维细胞,500 μg/mLG418筛选2周,G418减半继续培养2～3代,然后对转染筛选后的细胞进行PCR检测及核型分析.结果表明,转染24 h后荧光显微镜下检测到有绿色荧光蛋白表达,传至15代的细胞核型正常,含有正常牛的二倍体核型(60,XX),PCR检测得到大约850bp的片段.说明目的基因已成功导人并表达.研究所获得的转基因牛耳成纤维细胞整合并表达了外源基因,同时保持了遗传稳定性,可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛研究.
위료위핵이식법제작전인용균매기인극륭우제공공체세포,연구체외분리배양우피부성섬유세포병진행료인용균매기인전염.수선채용조직괴첩벽법분리배양우이성섬유세포,경전대순화후,지질법장함유쌍중사선표기적인용균매유선특이성표체재체전입체외배양적제4대우피부성섬유세포,500 μg/mLG418사선2주,G418감반계속배양2～3대,연후대전염사선후적세포진행PCR검측급핵형분석.결과표명,전염24 h후형광현미경하검측도유록색형광단백표체,전지15대적세포핵형정상,함유정상우적이배체핵형(60,XX),PCR검측득도대약850bp적편단.설명목적기인이성공도인병표체.연구소획득적전기인우이성섬유세포정합병표체료외원기인,동시보지료유전은정성,가작위체세포핵이식적공체세포진행전기인극륭우연구.