核定位信号肽提高核糖体区打靶载体转染效率的研究
핵정위신호태제고핵당체구타파재체전염효솔적연구
The Transfection Efficiency Improvement of hrDNA Targeting Vectors With NLS Peptide
  • 万方数据
    生物化学与生物物理进展 생물화학여생물물리진전
    PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
    2009年 10期 1281-1290 ,共10页

    石岩%刘雄昊%梁德生%冯劢%邬玲仟%杨俊林%李卓%赵凯%潘乾%龙志高%夏家辉

    석암%류웅호%량덕생%풍매%오령천%양준림%리탁%조개%반건%룡지고%하가휘

    核定位信号肽%核糖体区打靶载体%转染效率%原代皮肤成纤维细胞%基因治疗%聚乙烯亚胺 覈定位信號肽%覈糖體區打靶載體%轉染效率%原代皮膚成纖維細胞%基因治療%聚乙烯亞胺
    핵정위신호태%핵당체구타파재체%전염효솔%원대피부성섬유세포%기인치료%취을희아알
    核糖体区打靶载体(10～14 kb)是中南大学医学遗传学国家重点实验室构建的一种具有定点整合能力的非病毒载体,具有安全性好及长期稳定表达的特点,但是较低的转染率成为其应用于临床的主要障碍.核定位信号肽可以促进非病毒载体进入细胞核,从而提高其转染效率.但是核定位信号肽提高外源基凶表达的能力却严重受到其与DNA偶联方式及偶联剂的影响.采用偶联剂SPB可以通过静电作用将核糖体区打靶载体与SV40核定位信号肽有效结合,并且可以防止其被DNase降解.应用聚乙烯亚胺转染人原代皮肤成纤维细胞后,激光共聚焦显微镜观察显示,核定位信号肽可以在60 min内携带12 kb的质粒DNA进入细胞核.转染后48 h,流式细胞仪检测GFP表达,结果显示转染率提高了4～5倍.聚乙烯亚胺是一种毒性小,而且价格低廉的高分子转染试剂,广泛被应用于体内基因治疗的研究中,上述研究将会促进核糖体区打靶载体在临床基因治疗中的应用.
    핵당체구타파재체(10～14 kb)시중남대학의학유전학국가중점실험실구건적일충구유정점정합능력적비병독재체,구유안전성호급장기은정표체적특점,단시교저적전염솔성위기응용우림상적주요장애.핵정위신호태가이촉진비병독재체진입세포핵,종이제고기전염효솔.단시핵정위신호태제고외원기흉표체적능력각엄중수도기여DNA우련방식급우련제적영향.채용우련제SPB가이통과정전작용장핵당체구타파재체여SV40핵정위신호태유효결합,병차가이방지기피DNase강해.응용취을희아알전염인원대피부성섬유세포후,격광공취초현미경관찰현시,핵정위신호태가이재60 min내휴대12 kb적질립DNA진입세포핵.전염후48 h,류식세포의검측GFP표체,결과현시전염솔제고료4～5배.취을희아알시일충독성소,이차개격저렴적고분자전염시제,엄범피응용우체내기인치료적연구중,상술연구장회촉진핵당체구타파재체재림상기인치료중적응용.
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