中国脊柱脊髓杂志
中國脊柱脊髓雜誌
중국척주척수잡지
CHINESE JOURNAL OF SPINE AND SPINAL CORD
2010年
11期
907-912
,共6页
王超锋%阮狄克%张超%王德利%辛洪奎%张燕
王超鋒%阮狄剋%張超%王德利%辛洪奎%張燕
왕초봉%원적극%장초%왕덕리%신홍규%장연
基因转染%人骨形成蛋白7%重组2型腺相关病毒%髓核细胞
基因轉染%人骨形成蛋白7%重組2型腺相關病毒%髓覈細胞
기인전염%인골형성단백7%중조2형선상관병독%수핵세포
目的:观察重组2型腺相关病毒-人骨形成蛋白7(recombinant adeno-associated virus-2 expressing human bone morphogenetic protein-7,rAAV2-hBMP7)转染犬髓核细胞情况及其对细胞表型的影响.方法:用1岁龄Beagle犬L4/5椎间盘髓核进行髓核细胞体外培养,取第2代髓核细胞进行实验,实验组以rAAV2-hBMP7(1x105v.g/细胞)转染髓核细胞,对照组以重组2型腺相关病毒-增强型绿色荧光蛋白(recombinant adeno-associated virus-2 expressing enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)转染髓核细胞.在转染后4d、7d和14d以PCR检测髓核细胞中hBMP7的mRNA表达,在转染后7d和14d以Western blot法检测髓核细胞中hBMP7蛋白表达.在转染后4d、7d和14d采用RT-PCR法检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的mRNA含量,采用二甲基蓝及ELISA法分别检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白含量,结果:实验组髓核细胞表达hBMP7 mRNA及蛋白,并于转染后7d时表达量最高,而对照组无表达.实验组髓核细胞蛋白多糖mRNA及蛋白含量在转染后7d和14d 时较4d时明显增高,14d时较7d时亦明显升高(P<0.05),对照组各时间点无统计学差异(P>0.05);4d时实验组与对照组比较无明显差异,7d和14d时较对照组明显增加(P<0.05).同组各时间点Ⅰ型胶原mRNA及蛋白含量均无统计学差异,两组各时间点间比较无统计学差异(P>0.05).实验组髓核细胞Ⅱ型胶原mRNA及蛋白含量存转染后7d和14d时较4d时明显增高,14d时较7d亦明显升高(P<0.05).对照组各时间点无统计学差异(P＞0.05);实验组4d时与对照组比较无明显差异,7d和14d时较对照组明显增加(P<0.05).结论:rAAV2-hBMP7转染犬髓核细胞后能表达hBMP7蛋白,并能提高其蛋白多糖及Ⅱ型胶原含量.
目的:觀察重組2型腺相關病毒-人骨形成蛋白7(recombinant adeno-associated virus-2 expressing human bone morphogenetic protein-7,rAAV2-hBMP7)轉染犬髓覈細胞情況及其對細胞錶型的影響.方法:用1歲齡Beagle犬L4/5椎間盤髓覈進行髓覈細胞體外培養,取第2代髓覈細胞進行實驗,實驗組以rAAV2-hBMP7(1x105v.g/細胞)轉染髓覈細胞,對照組以重組2型腺相關病毒-增彊型綠色熒光蛋白(recombinant adeno-associated virus-2 expressing enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)轉染髓覈細胞.在轉染後4d、7d和14d以PCR檢測髓覈細胞中hBMP7的mRNA錶達,在轉染後7d和14d以Western blot法檢測髓覈細胞中hBMP7蛋白錶達.在轉染後4d、7d和14d採用RT-PCR法檢測蛋白多糖、Ⅰ型膠原和Ⅱ型膠原的mRNA含量,採用二甲基藍及ELISA法分彆檢測蛋白多糖、Ⅰ型膠原和Ⅱ型膠原的蛋白含量,結果:實驗組髓覈細胞錶達hBMP7 mRNA及蛋白,併于轉染後7d時錶達量最高,而對照組無錶達.實驗組髓覈細胞蛋白多糖mRNA及蛋白含量在轉染後7d和14d 時較4d時明顯增高,14d時較7d時亦明顯升高(P<0.05),對照組各時間點無統計學差異(P>0.05);4d時實驗組與對照組比較無明顯差異,7d和14d時較對照組明顯增加(P<0.05).同組各時間點Ⅰ型膠原mRNA及蛋白含量均無統計學差異,兩組各時間點間比較無統計學差異(P>0.05).實驗組髓覈細胞Ⅱ型膠原mRNA及蛋白含量存轉染後7d和14d時較4d時明顯增高,14d時較7d亦明顯升高(P<0.05).對照組各時間點無統計學差異(P＞0.05);實驗組4d時與對照組比較無明顯差異,7d和14d時較對照組明顯增加(P<0.05).結論:rAAV2-hBMP7轉染犬髓覈細胞後能錶達hBMP7蛋白,併能提高其蛋白多糖及Ⅱ型膠原含量.
목적:관찰중조2형선상관병독-인골형성단백7(recombinant adeno-associated virus-2 expressing human bone morphogenetic protein-7,rAAV2-hBMP7)전염견수핵세포정황급기대세포표형적영향.방법:용1세령Beagle견L4/5추간반수핵진행수핵세포체외배양,취제2대수핵세포진행실험,실험조이rAAV2-hBMP7(1x105v.g/세포)전염수핵세포,대조조이중조2형선상관병독-증강형록색형광단백(recombinant adeno-associated virus-2 expressing enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)전염수핵세포.재전염후4d、7d화14d이PCR검측수핵세포중hBMP7적mRNA표체,재전염후7d화14d이Western blot법검측수핵세포중hBMP7단백표체.재전염후4d、7d화14d채용RT-PCR법검측단백다당、Ⅰ형효원화Ⅱ형효원적mRNA함량,채용이갑기람급ELISA법분별검측단백다당、Ⅰ형효원화Ⅱ형효원적단백함량,결과:실험조수핵세포표체hBMP7 mRNA급단백,병우전염후7d시표체량최고,이대조조무표체.실험조수핵세포단백다당mRNA급단백함량재전염후7d화14d 시교4d시명현증고,14d시교7d시역명현승고(P<0.05),대조조각시간점무통계학차이(P>0.05);4d시실험조여대조조비교무명현차이,7d화14d시교대조조명현증가(P<0.05).동조각시간점Ⅰ형효원mRNA급단백함량균무통계학차이,량조각시간점간비교무통계학차이(P>0.05).실험조수핵세포Ⅱ형효원mRNA급단백함량존전염후7d화14d시교4d시명현증고,14d시교7d역명현승고(P<0.05).대조조각시간점무통계학차이(P＞0.05);실험조4d시여대조조비교무명현차이,7d화14d시교대조조명현증가(P<0.05).결론:rAAV2-hBMP7전염견수핵세포후능표체hBMP7단백,병능제고기단백다당급Ⅱ형효원함량.
