南京师大学报（自然科学版）
南京師大學報（自然科學版）
남경사대학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION)
2012年
1期
84-88
,共5页
彭琬昕%孙瑶湘%陈琛%金洁%邵根宝%王嫘
彭琬昕%孫瑤湘%陳琛%金潔%邵根寶%王嫘
팽완흔%손요상%진침%금길%소근보%왕류
红色荧光蛋白%MAP-LC3%自噬%肝癌
紅色熒光蛋白%MAP-LC3%自噬%肝癌
홍색형광단백%MAP-LC3%자서%간암
本实验根据已知的人MAP-LC3序列,以人脑胶质瘤U251细胞cDNA为模板扩增出去除终止密码子的MAP-LC3片段,定向克隆至红色荧光融合蛋白载体pDsRed-N1质粒中,构建了重组质粒pDsRed-LC3.将pDsRed-LC3转染HepG2细胞,48 h后用Western Blot、激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在细胞内的表达和分布情况,并观察血清饥饿时细胞发生白噬的情况.结果表明:(1)成功构建pDsRFP-LC3真核表达载体,该载体能在人肝癌细胞中表达；(2)血清饥饿应激实验证明,该载体可以良好地指示自噬泡的形成过程,为研究肿瘤细胞的自噬发生情况提供了一个重要而方便的工具.
本實驗根據已知的人MAP-LC3序列,以人腦膠質瘤U251細胞cDNA為模闆擴增齣去除終止密碼子的MAP-LC3片段,定嚮剋隆至紅色熒光融閤蛋白載體pDsRed-N1質粒中,構建瞭重組質粒pDsRed-LC3.將pDsRed-LC3轉染HepG2細胞,48 h後用Western Blot、激光共聚焦顯微鏡檢測融閤蛋白在細胞內的錶達和分佈情況,併觀察血清饑餓時細胞髮生白噬的情況.結果錶明:(1)成功構建pDsRFP-LC3真覈錶達載體,該載體能在人肝癌細胞中錶達；(2)血清饑餓應激實驗證明,該載體可以良好地指示自噬泡的形成過程,為研究腫瘤細胞的自噬髮生情況提供瞭一箇重要而方便的工具.
본실험근거이지적인MAP-LC3서렬,이인뇌효질류U251세포cDNA위모판확증출거제종지밀마자적MAP-LC3편단,정향극륭지홍색형광융합단백재체pDsRed-N1질립중,구건료중조질립pDsRed-LC3.장pDsRed-LC3전염HepG2세포,48 h후용Western Blot、격광공취초현미경검측융합단백재세포내적표체화분포정황,병관찰혈청기아시세포발생백서적정황.결과표명:(1)성공구건pDsRFP-LC3진핵표체재체,해재체능재인간암세포중표체；(2)혈청기아응격실험증명,해재체가이량호지지시자서포적형성과정,위연구종류세포적자서발생정황제공료일개중요이방편적공구.
