实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2012年
3期
211-214
,共4页
何敏%李兴花%刘华%陈宁宁%于艳辉%卢思广%刘健胜
何敏%李興花%劉華%陳寧寧%于豔輝%盧思廣%劉健勝
하민%리흥화%류화%진저저%우염휘%로사엄%류건성
染色质免疫共沉淀%调节性T淋巴细胞%三甲基化组蛋白H3赖氨酸4
染色質免疫共沉澱%調節性T淋巴細胞%三甲基化組蛋白H3賴氨痠4
염색질면역공침정%조절성T림파세포%삼갑기화조단백H3뢰안산4
目的 探讨天然调节性T淋巴细胞(nTreg)的三甲基化组蛋白H3赖氨酸4(H3 K4me3)对foxp3基因的影响,寻找维持调节性T淋巴细胞(Treg)表型长期稳定的方法.方法 使用免疫磁珠细胞(MACS)分选法从健康人外周血中分离出CD4+ CD25+Treg.对CD4+ CD25+ Treg分别进行0d、3d、7d培养,其中0d为阴性对照组,3d为阳性组1,7d为阳性组2,采用流式细胞仪(FCM)对0d、3d、7 d nTreg膜表面标志CD25的变化进行检测,并分别对培养0d、3d、7d的nTreg细胞通过染色质免疫共沉淀(ChIP-PCR)法检测foxp3基因启动子区H3 K4 me3及DNA水平变化.结果 1.使用细胞计数Kit-8(CCK-8)法确定植物血凝素(PHA)质量浓度在10 mg·L-1时为最佳的药物质量浓度,对Treg细胞的增殖作用最为显著.nTreg细胞培养0d、3d、7d的表型变化呈递减趋势.随着培养时间(0d、3d、7 d)的延长,与foxp3基因启动子区结合的H3 K4 me3表达逐渐减少.2.采用ChIP-PCR法对培养0d、3d、7d的nTreg细胞检测与H3 K4 me3结合的foxp3基因启动子区DNA水平变化.DNA凝胶电泳图显示,0d、3d在204 bp处可见条带(灰度值分别为2.31、0.91),7d有模糊条带或无条带.三者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PHA不能维持Treg细胞的表型稳定,其机制与H3 K4 me3减少有关.
目的 探討天然調節性T淋巴細胞(nTreg)的三甲基化組蛋白H3賴氨痠4(H3 K4me3)對foxp3基因的影響,尋找維持調節性T淋巴細胞(Treg)錶型長期穩定的方法.方法 使用免疫磁珠細胞(MACS)分選法從健康人外週血中分離齣CD4+ CD25+Treg.對CD4+ CD25+ Treg分彆進行0d、3d、7d培養,其中0d為陰性對照組,3d為暘性組1,7d為暘性組2,採用流式細胞儀(FCM)對0d、3d、7 d nTreg膜錶麵標誌CD25的變化進行檢測,併分彆對培養0d、3d、7d的nTreg細胞通過染色質免疫共沉澱(ChIP-PCR)法檢測foxp3基因啟動子區H3 K4 me3及DNA水平變化.結果 1.使用細胞計數Kit-8(CCK-8)法確定植物血凝素(PHA)質量濃度在10 mg·L-1時為最佳的藥物質量濃度,對Treg細胞的增殖作用最為顯著.nTreg細胞培養0d、3d、7d的錶型變化呈遞減趨勢.隨著培養時間(0d、3d、7 d)的延長,與foxp3基因啟動子區結閤的H3 K4 me3錶達逐漸減少.2.採用ChIP-PCR法對培養0d、3d、7d的nTreg細胞檢測與H3 K4 me3結閤的foxp3基因啟動子區DNA水平變化.DNA凝膠電泳圖顯示,0d、3d在204 bp處可見條帶(灰度值分彆為2.31、0.91),7d有模糊條帶或無條帶.三者比較差異有統計學意義(P＜0.05).結論 PHA不能維持Treg細胞的錶型穩定,其機製與H3 K4 me3減少有關.
목적 탐토천연조절성T림파세포(nTreg)적삼갑기화조단백H3뢰안산4(H3 K4me3)대foxp3기인적영향,심조유지조절성T림파세포(Treg)표형장기은정적방법.방법 사용면역자주세포(MACS)분선법종건강인외주혈중분리출CD4+ CD25+Treg.대CD4+ CD25+ Treg분별진행0d、3d、7d배양,기중0d위음성대조조,3d위양성조1,7d위양성조2,채용류식세포의(FCM)대0d、3d、7 d nTreg막표면표지CD25적변화진행검측,병분별대배양0d、3d、7d적nTreg세포통과염색질면역공침정(ChIP-PCR)법검측foxp3기인계동자구H3 K4 me3급DNA수평변화.결과 1.사용세포계수Kit-8(CCK-8)법학정식물혈응소(PHA)질량농도재10 mg·L-1시위최가적약물질량농도,대Treg세포적증식작용최위현저.nTreg세포배양0d、3d、7d적표형변화정체감추세.수착배양시간(0d、3d、7 d)적연장,여foxp3기인계동자구결합적H3 K4 me3표체축점감소.2.채용ChIP-PCR법대배양0d、3d、7d적nTreg세포검측여H3 K4 me3결합적foxp3기인계동자구DNA수평변화.DNA응효전영도현시,0d、3d재204 bp처가견조대(회도치분별위2.31、0.91),7d유모호조대혹무조대.삼자비교차이유통계학의의(P＜0.05).결론 PHA불능유지Treg세포적표형은정,기궤제여H3 K4 me3감소유관.
