第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2004年
12期
1299-1302
,共4页
陆慧琦%韩焕兴%安峰%叶伟民%曾万杰%薛菖
陸慧琦%韓煥興%安峰%葉偉民%曾萬傑%薛菖
륙혜기%한환흥%안봉%협위민%증만걸%설창
干扰素α%抗HBs抗体%融合蛋白
榦擾素α%抗HBs抗體%融閤蛋白
간우소α%항HBs항체%융합단백
目的:构建人源单克隆抗-HBs Fab-IFN-α表达载体,探讨该融合蛋白原核表达的可行性及其生物学活性.方法:用PCR体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBsFab基因的载体,插入点位于轻链基因3'未端,利用酶切、PCR鉴定筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠杆菌,挑选单克隆表达、纯化目的蛋白,用ELISA方法检测融合蛋白IFN-α的抗原性及其抗体亲和性,用WISH细胞检测IFN-α生物学活性.结果:利用插入了人源抗-HBs Fab基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的λ轻链与IFN-α的融合蛋白,其既具有与抗-HBs Fab相近的HBsAg的亲和力,又具有干扰素的活性.结论:λ轻链与IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达某些特异抗体和其介导的部分生物活性因子,是一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了线索.
目的:構建人源單剋隆抗-HBs Fab-IFN-α錶達載體,探討該融閤蛋白原覈錶達的可行性及其生物學活性.方法:用PCR體外擴增目的基因IFN-α,單酶點插入已含人源抗-HBsFab基因的載體,插入點位于輕鏈基因3'未耑,利用酶切、PCR鑒定篩選正確插入的暘性剋隆,轉化大腸桿菌,挑選單剋隆錶達、純化目的蛋白,用ELISA方法檢測融閤蛋白IFN-α的抗原性及其抗體親和性,用WISH細胞檢測IFN-α生物學活性.結果:利用插入瞭人源抗-HBs Fab基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原覈錶達繫統,成功錶達瞭具生物活性的λ輕鏈與IFN-α的融閤蛋白,其既具有與抗-HBs Fab相近的HBsAg的親和力,又具有榦擾素的活性.結論:λ輕鏈與IFN-α融閤蛋白的成功錶達錶明,應用原覈繫統能夠同時錶達某些特異抗體和其介導的部分生物活性因子,是一種經濟、有效的方法,為特異抗體及其介導融閤蛋白的製備和臨床應用提供瞭線索.
목적:구건인원단극륭항-HBs Fab-IFN-α표체재체,탐토해융합단백원핵표체적가행성급기생물학활성.방법:용PCR체외확증목적기인IFN-α,단매점삽입이함인원항-HBsFab기인적재체,삽입점위우경련기인3'미단,이용매절、PCR감정사선정학삽입적양성극륭,전화대장간균,도선단극륭표체、순화목적단백,용ELISA방법검측융합단백IFN-α적항원성급기항체친화성,용WISH세포검측IFN-α생물학활성.결과:이용삽입료인원항-HBs Fab기인급IFN-α기인적pBAD/gⅢA원핵표체계통,성공표체료구생물활성적λ경련여IFN-α적융합단백,기기구유여항-HBs Fab상근적HBsAg적친화력,우구유간우소적활성.결론:λ경련여IFN-α융합단백적성공표체표명,응용원핵계통능구동시표체모사특이항체화기개도적부분생물활성인자,시일충경제、유효적방법,위특이항체급기개도융합단백적제비화림상응용제공료선색.
