CAJ | 학술논문

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的真核表达载体,获得重组质粒稳定转染的P815细胞克隆. 方法:PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段Ct;合成HCV E2区模拟表位和NS3～NS5七个T细胞表位基因Em;分别克隆入穿梭质粒载体pDE22中. 用BamHⅠ/HindⅢ双酶切pDE22得到复合多表位基因CtEm,再将CtEm亚克隆入真核表达载体pCDNA3.1(-),构建重组质粒pCDNA3.1(-)-CtEm,经酶切鉴定及测序正确后,通过脂质体转染至P815细胞,持续G418压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系,用RT-PCR,IFA,Western-blot证实该稳定转染细胞系可以表达多表位基因. 结果:构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,建立了稳定转染的P815细胞系. 结论:构建HCV多表位基因的真核表达载体,稳定转染P815细胞,为进一步在疫苗研究中分析 CTL功能建立了靶细胞.
목적:구건병형간염병독(HCV)다표위기인적진핵표체재체,획득중조질립은정전염적P815세포극륭. 방법:PCR방법확증핵심구최기단부분결실적기인편단Ct;합성HCV E2구모의표위화NS3～NS5칠개T세포표위기인Em;분별극륭입천사질립재체pDE22중. 용BamHⅠ/HindⅢ쌍매절pDE22득도복합다표위기인CtEm,재장CtEm아극륭입진핵표체재체pCDNA3.1(-),구건중조질립pCDNA3.1(-)-CtEm,경매절감정급측서정학후,통과지질체전염지P815세포,지속G418압력선택화유한희석법극륭화획득은정전염적세포계,용RT-PCR,IFA,Western-blot증실해은정전염세포계가이표체다표위기인. 결과:구건료진핵표체재체pcDNA3.1(-)-CtEm,건립료은정전염적P815세포계. 결론:구건HCV다표위기인적진핵표체재체,은정전염P815세포,위진일보재역묘연구중분석 CTL공능건립료파세포.