CAJ | 학술논문

地高辛标记伪狂犬病病毒(PRV)Ea株短区段蛋白激酶(PK)基因3'端0.4 kb片段,Southern杂交确定短区段PK基因定位在基因组DNA BamH I 4.0 kb片段中.将该片段克隆获得重组质粒pSB304.对pSB304亚克隆,构建了仅含完整PK基因约1.3 kb片段的重组质粒pSB305,并进行了序列测定.结果表明,PK基因存在2种可能的同框编码方式,分别编码388或334个氨基酸残基,并具有真核细胞蛋白激酶催化结构域序列.同国外PRV NIA-3、Ka株相比,氨基酸同源性分别为98.8%和97.3%,有意义的是Ea株、Ka株均较NIA-3株在同一位置缺失2个氨基酸(Asp,Gly).进一步对pSB305和含gG全基因以及部分gD基因的质粒pUSK进行酶切拼接,将PK基因大部分编码区、gG基因5'端部分编码区进行缺失,构建成两端同源侧翼分别为3.1 kb和1.6 kb的PK、gG双缺失转移载体pLR001.上述结果为深入研究PK基因功能及研制更安全的TK-/PK-/gG-三缺失基因工程疫苗奠定了基础.
지고신표기위광견병병독(PRV)Ea주단구단단백격매(PK)기인3'단0.4 kb편단,Southern잡교학정단구단PK기인정위재기인조DNA BamH I 4.0 kb편단중.장해편단극륭획득중조질립pSB304.대pSB304아극륭,구건료부함완정PK기인약1.3 kb편단적중조질립pSB305,병진행료서렬측정.결과표명,PK기인존재2충가능적동광편마방식,분별편마388혹334개안기산잔기,병구유진핵세포단백격매최화결구역서렬.동국외PRV NIA-3、Ka주상비,안기산동원성분별위98.8%화97.3%,유의의적시Ea주、Ka주균교NIA-3주재동일위치결실2개안기산(Asp,Gly).진일보대pSB305화함gG전기인이급부분gD기인적질립pUSK진행매절병접,장PK기인대부분편마구、gG기인5'단부분편마구진행결실,구건성량단동원측익분별위3.1 kb화1.6 kb적PK、gG쌍결실전이재체pLR001.상술결과위심입연구PK기인공능급연제경안전적TK-/PK-/gG-삼결실기인공정역묘전정료기출.