中国公共卫生
中國公共衛生
중국공공위생
CHINA PUBLIC HEALTH
2007年
5期
562-564
,共3页
胡权%张正茂%张小勇%张振华%雷延昌%周敦金%黄建国%杨东亮
鬍權%張正茂%張小勇%張振華%雷延昌%週敦金%黃建國%楊東亮
호권%장정무%장소용%장진화%뢰연창%주돈금%황건국%양동량
鸭乙型肝炎病毒%1.5倍DHBV基因组%鸡肝癌细胞系(LMH)%基因表达
鴨乙型肝炎病毒%1.5倍DHBV基因組%鷄肝癌細胞繫(LMH)%基因錶達
압을형간염병독%1.5배DHBV기인조%계간암세포계(LMH)%기인표체
目的 构建鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染性克隆,通过体外细胞转染获得单一来源、基因序列清楚的体内实验的感染毒种.方法 以湖北麻鸭DHBV分离株(DQ276978)为模板,用PCR法从该DHBV全基因组克隆质粒(pMD-DHBV)和DHBV阳性血清中获取3部分基因片段,总长4.4 kb,克隆至载体PCR2.1的SacⅠ和NotⅠ酶切位点,构建含1.5倍鸭乙型肝炎病毒全基因的重组质粒,并酶切鉴定其插入方向.将构建的重组质粒经脂质体LipofectineTM 2000导入鸡肝癌细胞系(LMH)细胞中转染表达,收集纯化后的转染细胞培养上清液作为体内实验感染的标准毒种.结果 PCR鉴定、酶切鉴定及序列测定,证实成功获得正向插入的1.5倍鸭乙型肝炎病毒全基因重组质粒PCR2.1-DHBV1.5.Southernblot检测表明,该重组质粒在LMH细胞内存在各种病毒复制中间体;通过电镜观察,转染细胞上清液中存在DHBV完整病毒颗粒.结论 经体外重组,构建出携带1.5倍加长DHBV基因组片段的重组质粒PCR2.1-DHBV1.5,并可在鸡肝癌细胞LMH中介导高水平病毒复制,从而获得含可自我复制病毒颗粒的转染细胞上清液作为动物体内感染接种物.
目的 構建鴨乙型肝炎病毒(DHBV)感染性剋隆,通過體外細胞轉染穫得單一來源、基因序列清楚的體內實驗的感染毒種.方法 以湖北痳鴨DHBV分離株(DQ276978)為模闆,用PCR法從該DHBV全基因組剋隆質粒(pMD-DHBV)和DHBV暘性血清中穫取3部分基因片段,總長4.4 kb,剋隆至載體PCR2.1的SacⅠ和NotⅠ酶切位點,構建含1.5倍鴨乙型肝炎病毒全基因的重組質粒,併酶切鑒定其插入方嚮.將構建的重組質粒經脂質體LipofectineTM 2000導入鷄肝癌細胞繫(LMH)細胞中轉染錶達,收集純化後的轉染細胞培養上清液作為體內實驗感染的標準毒種.結果 PCR鑒定、酶切鑒定及序列測定,證實成功穫得正嚮插入的1.5倍鴨乙型肝炎病毒全基因重組質粒PCR2.1-DHBV1.5.Southernblot檢測錶明,該重組質粒在LMH細胞內存在各種病毒複製中間體;通過電鏡觀察,轉染細胞上清液中存在DHBV完整病毒顆粒.結論 經體外重組,構建齣攜帶1.5倍加長DHBV基因組片段的重組質粒PCR2.1-DHBV1.5,併可在鷄肝癌細胞LMH中介導高水平病毒複製,從而穫得含可自我複製病毒顆粒的轉染細胞上清液作為動物體內感染接種物.
목적 구건압을형간염병독(DHBV)감염성극륭,통과체외세포전염획득단일래원、기인서렬청초적체내실험적감염독충.방법 이호북마압DHBV분리주(DQ276978)위모판,용PCR법종해DHBV전기인조극륭질립(pMD-DHBV)화DHBV양성혈청중획취3부분기인편단,총장4.4 kb,극륭지재체PCR2.1적SacⅠ화NotⅠ매절위점,구건함1.5배압을형간염병독전기인적중조질립,병매절감정기삽입방향.장구건적중조질립경지질체LipofectineTM 2000도입계간암세포계(LMH)세포중전염표체,수집순화후적전염세포배양상청액작위체내실험감염적표준독충.결과 PCR감정、매절감정급서렬측정,증실성공획득정향삽입적1.5배압을형간염병독전기인중조질립PCR2.1-DHBV1.5.Southernblot검측표명,해중조질립재LMH세포내존재각충병독복제중간체;통과전경관찰,전염세포상청액중존재DHBV완정병독과립.결론 경체외중조,구건출휴대1.5배가장DHBV기인조편단적중조질립PCR2.1-DHBV1.5,병가재계간암세포LMH중개도고수평병독복제,종이획득함가자아복제병독과립적전염세포상청액작위동물체내감염접충물.
