癌变·畸变·突变
癌變·畸變·突變
암변·기변·돌변
CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
2007年
4期
285-289
,共5页
庄东红%陈秋佳%欧阳永长
莊東紅%陳鞦佳%歐暘永長
장동홍%진추가%구양영장
苦瓜%克隆%原核表达%MAP30%活性片段
苦瓜%剋隆%原覈錶達%MAP30%活性片段
고과%극륭%원핵표체%MAP30%활성편단
背景与目的:MAP30是一种具有抗肿瘤、抗HIV和抗病毒等功能的蛋白.通过克隆和表达该蛋白的核心片段,用于进一步研究基因功能和结构域之间的关系.材料与方法:设计了两对特异性的引物,通过PCR技术从苦瓜总DNA中分别扩增出两段含有成熟MAP30蛋白基因的功能性片段T8-S194和T8N263,然后将目标基因克隆到原核表达载体pET-28a上,构建成带有C端6His-tag的融合表达载体,经测序鉴定后用CaCl2介导的化学转化法转化到E.coli RosettaTM(DE3)pLysS中.利用PCR筛选出阳性克隆,经IPTG诱导工程菌表达出重组蛋白.通过Western blot对重组蛋白进行分析. 结果:含T8-S194和T8-N286基因片段的两个表达载体构建成功,它们的表达重组蛋白能与兔抗His-tag多克隆抗体发生特异性反应.结论:构建的两个含目的基因的表达载体均能在E.coli RosettaTM(DE3)pLysS中表达出预期的重组蛋白,为进一步研究这两个重组蛋白打下了基础.
揹景與目的:MAP30是一種具有抗腫瘤、抗HIV和抗病毒等功能的蛋白.通過剋隆和錶達該蛋白的覈心片段,用于進一步研究基因功能和結構域之間的關繫.材料與方法:設計瞭兩對特異性的引物,通過PCR技術從苦瓜總DNA中分彆擴增齣兩段含有成熟MAP30蛋白基因的功能性片段T8-S194和T8N263,然後將目標基因剋隆到原覈錶達載體pET-28a上,構建成帶有C耑6His-tag的融閤錶達載體,經測序鑒定後用CaCl2介導的化學轉化法轉化到E.coli RosettaTM(DE3)pLysS中.利用PCR篩選齣暘性剋隆,經IPTG誘導工程菌錶達齣重組蛋白.通過Western blot對重組蛋白進行分析. 結果:含T8-S194和T8-N286基因片段的兩箇錶達載體構建成功,它們的錶達重組蛋白能與兔抗His-tag多剋隆抗體髮生特異性反應.結論:構建的兩箇含目的基因的錶達載體均能在E.coli RosettaTM(DE3)pLysS中錶達齣預期的重組蛋白,為進一步研究這兩箇重組蛋白打下瞭基礎.
배경여목적:MAP30시일충구유항종류、항HIV화항병독등공능적단백.통과극륭화표체해단백적핵심편단,용우진일보연구기인공능화결구역지간적관계.재료여방법:설계료량대특이성적인물,통과PCR기술종고과총DNA중분별확증출량단함유성숙MAP30단백기인적공능성편단T8-S194화T8N263,연후장목표기인극륭도원핵표체재체pET-28a상,구건성대유C단6His-tag적융합표체재체,경측서감정후용CaCl2개도적화학전화법전화도E.coli RosettaTM(DE3)pLysS중.이용PCR사선출양성극륭,경IPTG유도공정균표체출중조단백.통과Western blot대중조단백진행분석. 결과:함T8-S194화T8-N286기인편단적량개표체재체구건성공,타문적표체중조단백능여토항His-tag다극륭항체발생특이성반응.결론:구건적량개함목적기인적표체재체균능재E.coli RosettaTM(DE3)pLysS중표체출예기적중조단백,위진일보연구저량개중조단백타하료기출.
