果树学报
果樹學報
과수학보
JOURNAL OF FRUIT SCIENCE
2008年
4期
548-551
,共4页
侯丽霞%何启伟%赵双宜%焦自高%王崇启%董玉梅
侯麗霞%何啟偉%趙雙宜%焦自高%王崇啟%董玉梅
후려하%하계위%조쌍의%초자고%왕숭계%동옥매
甜瓜%蔗糖磷酸合成酶%基因克隆%工程载体
甜瓜%蔗糖燐痠閤成酶%基因剋隆%工程載體
첨과%자당린산합성매%기인극륭%공정재체
蔗糖磷酸合成酶在甜瓜果实蔗糖合成途径中起关键性的调节作用,克隆该基因并导入甜瓜低糖自交系,可改良甜瓜果实品质创新优良种质.从甜瓜幼苗叶片提取总RNA,利用RT-PCR与Southern blot方法相结合.重组子质粒经限制性内切酶酶切和PCR验证以及测序同源性比较,克隆到基因的5'(2 859 bp)和3'(852 bp).应用高保真Taq聚合酶PCR拼接蔗糖磷酸合成酶完整cDNA序列3 692 bp.该片段与GenBank中其它植物基因序列具有97％～99％的同源性,登录号DQ364058.应用BamH Ⅰ、Kpn,Ⅰ、Ggl Ⅱ限制性酶切获得植物双元表达载体pROK2及基因的线性片段,通过T4连接酶反应,构建了以CaMV35S为启动子,以Tnos为终止子的工程载体pROK-SIS.该载体含有Npt-Ⅱ选择标记基因.
蔗糖燐痠閤成酶在甜瓜果實蔗糖閤成途徑中起關鍵性的調節作用,剋隆該基因併導入甜瓜低糖自交繫,可改良甜瓜果實品質創新優良種質.從甜瓜幼苗葉片提取總RNA,利用RT-PCR與Southern blot方法相結閤.重組子質粒經限製性內切酶酶切和PCR驗證以及測序同源性比較,剋隆到基因的5'(2 859 bp)和3'(852 bp).應用高保真Taq聚閤酶PCR拼接蔗糖燐痠閤成酶完整cDNA序列3 692 bp.該片段與GenBank中其它植物基因序列具有97％～99％的同源性,登錄號DQ364058.應用BamH Ⅰ、Kpn,Ⅰ、Ggl Ⅱ限製性酶切穫得植物雙元錶達載體pROK2及基因的線性片段,通過T4連接酶反應,構建瞭以CaMV35S為啟動子,以Tnos為終止子的工程載體pROK-SIS.該載體含有Npt-Ⅱ選擇標記基因.
자당린산합성매재첨과과실자당합성도경중기관건성적조절작용,극륭해기인병도입첨과저당자교계,가개량첨과과실품질창신우량충질.종첨과유묘협편제취총RNA,이용RT-PCR여Southern blot방법상결합.중조자질립경한제성내절매매절화PCR험증이급측서동원성비교,극륭도기인적5'(2 859 bp)화3'(852 bp).응용고보진Taq취합매PCR병접자당린산합성매완정cDNA서렬3 692 bp.해편단여GenBank중기타식물기인서렬구유97％～99％적동원성,등록호DQ364058.응용BamH Ⅰ、Kpn,Ⅰ、Ggl Ⅱ한제성매절획득식물쌍원표체재체pROK2급기인적선성편단,통과T4련접매반응,구건료이CaMV35S위계동자,이Tnos위종지자적공정재체pROK-SIS.해재체함유Npt-Ⅱ선택표기기인.
