CAJ | 학술논문

研究已证实杆状病毒可进入某些哺乳动物细胞,这提示了可将重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体.利用已构建的重组杆状病毒BacV-CMV-EGFPA,以含病毒的Sf9细胞培养上清同时孵育多种哺乳动物细胞,利用流式细胞术检测报告基因在不同细胞株中的转移效率及表达效率.共使用了20种哺乳动物细胞株,其中有12种人类组织细胞,7种小鼠组织细胞,1种猴组织细胞.实验结果显示携带CMV启动子的重组杆状病毒可有效进入多数哺乳动物细胞,其中对人、猴来源细胞的基因转移效率显著高于对鼠源细胞,对贴壁细胞的基因转移效率显著高于对悬浮细胞.同时,通过脂质体LipofectAMINE将携带有CMV启动子和EGFP基因的哺乳动物细胞表达质粒pCDNA3.1-EGFP分别转染部分特别是被认为杆状病毒进入能力较低的细胞株,结果显示CMV启动子在这些细胞中均可有效引导EGFP基因的表达,因此认为携带了CMV启动子的重组杆状病毒对不同哺乳动物细胞基因转移效率能基本反映出杆状病毒对不同种哺乳动物细胞的进入能力.通过综合比较携带CMV启动子的杆状病毒对不同种属及组织来源细胞的基因转移及表达效率,可看出杆状病毒对灵长类动物贴壁细胞的基因转移及表达效果是较好的,而对小鼠来源的细胞及悬浮培养细胞却并不十分理想,这表明将重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的基因转移工具,仍有其局限性,不一定对所有的细胞都合适,在应用时应予以充分考虑.
연구이증실간상병독가진입모사포유동물세포,저제시료가장중조간상병독작위일충대포유동물세포적신형기인전이재체.이용이구건적중조간상병독BacV-CMV-EGFPA,이함병독적Sf9세포배양상청동시부육다충포유동물세포,이용류식세포술검측보고기인재불동세포주중적전이효솔급표체효솔.공사용료20충포유동물세포주,기중유12충인류조직세포,7충소서조직세포,1충후조직세포.실험결과현시휴대CMV계동자적중조간상병독가유효진입다수포유동물세포,기중대인、후래원세포적기인전이효솔현저고우대서원세포,대첩벽세포적기인전이효솔현저고우대현부세포.동시,통과지질체LipofectAMINE장휴대유CMV계동자화EGFP기인적포유동물세포표체질립pCDNA3.1-EGFP분별전염부분특별시피인위간상병독진입능력교저적세포주,결과현시CMV계동자재저사세포중균가유효인도EGFP기인적표체,인차인위휴대료CMV계동자적중조간상병독대불동포유동물세포기인전이효솔능기본반영출간상병독대불동충포유동물세포적진입능력.통과종합비교휴대CMV계동자적간상병독대불동충속급조직래원세포적기인전이급표체효솔,가간출간상병독대령장류동물첩벽세포적기인전이급표체효과시교호적,이대소서래원적세포급현부배양세포각병불십분이상,저표명장중조간상병독작위일충대포유동물세포적기인전이공구,잉유기국한성,불일정대소유적세포도합괄,재응용시응여이충분고필.