农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2004年
4期
446-449
,共4页
吕文平%许梓荣%杜文理%李卫芬%孙建义
呂文平%許梓榮%杜文理%李衛芬%孫建義
려문평%허재영%두문리%리위분%손건의
β-1,3-1,4葡聚糖酶%地衣芽孢杆菌%克隆%表达
β-1,3-1,4葡聚糖酶%地衣芽孢桿菌%剋隆%錶達
β-1,3-1,4포취당매%지의아포간균%극륭%표체
提取地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)基因组,通过PCR克隆了该菌的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因全长.该基因全长818bp,ORF为732bp,编码243个氨基酸,计算分子量为27.35 kD,等电点为8.31.经Blast分析,该序列与短小芽孢杆菌(B.pumilus)同源性最高(99%),而与基因库中地衣芽孢杆菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225317).用BamH Ⅰ和XhoⅠ双酶切目的片断和表达载体pET-30a(+)后相连接,构建重组表达载体pET-lic,并导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中表达.酶学特性表明:SDS-PAGE电泳在27 kD左右有表达蛋白带,该工程菌总酶活达67.34 U/mL,是出发菌的60倍,最适温度在50℃左右,最适pH在5～6之间.该工程菌可作为材料构建耐热性好和酶活高的杂合基因工程菌.
提取地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)基因組,通過PCR剋隆瞭該菌的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因全長.該基因全長818bp,ORF為732bp,編碼243箇氨基痠,計算分子量為27.35 kD,等電點為8.31.經Blast分析,該序列與短小芽孢桿菌(B.pumilus)同源性最高(99%),而與基因庫中地衣芽孢桿菌的同源性為94%,該基因已被GenBank接受(AY225317).用BamH Ⅰ和XhoⅠ雙酶切目的片斷和錶達載體pET-30a(+)後相連接,構建重組錶達載體pET-lic,併導入大腸桿菌(Escherichia coli)BL21菌株中錶達.酶學特性錶明:SDS-PAGE電泳在27 kD左右有錶達蛋白帶,該工程菌總酶活達67.34 U/mL,是齣髮菌的60倍,最適溫度在50℃左右,最適pH在5～6之間.該工程菌可作為材料構建耐熱性好和酶活高的雜閤基因工程菌.
제취지의아포간균(Bacillus licheniformis)기인조,통과PCR극륭료해균적β-1,3-1,4-포취당매기인전장.해기인전장818bp,ORF위732bp,편마243개안기산,계산분자량위27.35 kD,등전점위8.31.경Blast분석,해서렬여단소아포간균(B.pumilus)동원성최고(99%),이여기인고중지의아포간균적동원성위94%,해기인이피GenBank접수(AY225317).용BamH Ⅰ화XhoⅠ쌍매절목적편단화표체재체pET-30a(+)후상련접,구건중조표체재체pET-lic,병도입대장간균(Escherichia coli)BL21균주중표체.매학특성표명:SDS-PAGE전영재27 kD좌우유표체단백대,해공정균총매활체67.34 U/mL,시출발균적60배,최괄온도재50℃좌우,최괄pH재5～6지간.해공정균가작위재료구건내열성호화매활고적잡합기인공정균.
