现代免疫学
現代免疫學
현대면역학
CURRENT IMMUNOLOGY
2007年
4期
289-293
,共5页
孙玮丽%陈永井%孙中文%徐耀瑜%胡玲玲%张学光%邱玉华
孫瑋麗%陳永井%孫中文%徐耀瑜%鬍玲玲%張學光%邱玉華
손위려%진영정%손중문%서요유%호령령%장학광%구옥화
CTLA-4%B7%基因转染%共刺激分子%树突状细胞%表达
CTLA-4%B7%基因轉染%共刺激分子%樹突狀細胞%錶達
CTLA-4%B7%기인전염%공자격분자%수돌상세포%표체
从PHA活化的人外周血T细胞中抽提总RNA,经RT-PCR扩增出CTLA-4的全长基因,构建逆转录病毒载体pEGZ-Term/CTLA-4,经PCR及电泳鉴定后感染包装细胞293T.收集培养上清感染L929细胞.用Zeocin选择培养.经免疫荧光及流式细胞术进行筛选,获取稳定表达CTLA-4分子的细胞株CTLA-4/L929.将CTLA-4/L929经丝裂霉素处理后与体外细胞因子诱导的树突状细胞共同孵育.分别于24、48及72 h,用直接免疫荧光法和流式细胞术分析树突状细胞B7-1和B7-2分子的表达.研究结果显示,构建的重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/CTLA-4的PCR产物长约700 bp,与人CTLA-4基因的长度一致.经Zeocin选择及多次亚克隆化培养,CTLA-4基因转染细胞CTLA-4/L929稳定表达膜型CTLA-4分子.以其为刺激细胞与树突状细胞共同培养后,可明显下调树突状细胞B7-1的表达,但对B7-2的表达没有影响.本研究获得的CTLA-4基因转染细胞株,为进一步探讨CTLA-4及其配基分子在免疫应答中的作用与机制提供了手段.
從PHA活化的人外週血T細胞中抽提總RNA,經RT-PCR擴增齣CTLA-4的全長基因,構建逆轉錄病毒載體pEGZ-Term/CTLA-4,經PCR及電泳鑒定後感染包裝細胞293T.收集培養上清感染L929細胞.用Zeocin選擇培養.經免疫熒光及流式細胞術進行篩選,穫取穩定錶達CTLA-4分子的細胞株CTLA-4/L929.將CTLA-4/L929經絲裂黴素處理後與體外細胞因子誘導的樹突狀細胞共同孵育.分彆于24、48及72 h,用直接免疫熒光法和流式細胞術分析樹突狀細胞B7-1和B7-2分子的錶達.研究結果顯示,構建的重組逆轉錄病毒載體pEGZ-Term/CTLA-4的PCR產物長約700 bp,與人CTLA-4基因的長度一緻.經Zeocin選擇及多次亞剋隆化培養,CTLA-4基因轉染細胞CTLA-4/L929穩定錶達膜型CTLA-4分子.以其為刺激細胞與樹突狀細胞共同培養後,可明顯下調樹突狀細胞B7-1的錶達,但對B7-2的錶達沒有影響.本研究穫得的CTLA-4基因轉染細胞株,為進一步探討CTLA-4及其配基分子在免疫應答中的作用與機製提供瞭手段.
종PHA활화적인외주혈T세포중추제총RNA,경RT-PCR확증출CTLA-4적전장기인,구건역전록병독재체pEGZ-Term/CTLA-4,경PCR급전영감정후감염포장세포293T.수집배양상청감염L929세포.용Zeocin선택배양.경면역형광급류식세포술진행사선,획취은정표체CTLA-4분자적세포주CTLA-4/L929.장CTLA-4/L929경사렬매소처리후여체외세포인자유도적수돌상세포공동부육.분별우24、48급72 h,용직접면역형광법화류식세포술분석수돌상세포B7-1화B7-2분자적표체.연구결과현시,구건적중조역전록병독재체pEGZ-Term/CTLA-4적PCR산물장약700 bp,여인CTLA-4기인적장도일치.경Zeocin선택급다차아극륭화배양,CTLA-4기인전염세포CTLA-4/L929은정표체막형CTLA-4분자.이기위자격세포여수돌상세포공동배양후,가명현하조수돌상세포B7-1적표체,단대B7-2적표체몰유영향.본연구획득적CTLA-4기인전염세포주,위진일보탐토CTLA-4급기배기분자재면역응답중적작용여궤제제공료수단.
