CAJ | 학술논문

以水牛耳皮成纤维细胞为供体细胞,采用电融合方法,探讨细胞松弛素B(CB)对水牛体细胞核移植效果的影响.体外成熟培养22～24 h的水牛卵母细胞去核后.将经0.1 mg/L Aphidicolin(APD)+0.5%FBS培养2～9 d的水牛耳皮成纤维细胞注射到卵周隙中再经电融合(100 V/mm,15μs,电脉冲3次)构建核移植重构胚.重构胚经化学激活后(5 μmol/L)离子霉素5 min,2 mmol/L 6-DMAP 3 h)培养,7～9 d评定其胚胎发育能力.结果显示,在含CB(3 mg/L)的融合液中进行电融合后,核移植的融合率、重组胚的存活率、卵裂率和囊胚率与对照组(不含CB)相比均无显著差异(P>0.05);核移植重组胚激活前用含CB(6 mg/L)的培养液培养1 h,其激活后的存活率(97.52%)和体外囊胚发育率(22.09%)均显著地高于未经CB处理的重组胚的存活率(93.87%)和囊胚率(13.25%,P<0.05);重组胚经离子霉素激活5 min后,在6-DMAP+CB中培养3 h的分裂率明显低于放在6-DMAP中培养3 h的分裂率(65.37% vs 78.92%,P<0.05),但囊胚发育率无显著差异(11.19% vs 10.96%,P>0.05).这表明水牛体细胞核移植电融合时,融合液中不添加CB,而核移植重组胚激活前经CB培养处理后,有利于胚胎的进一步发育,但激活后用CB培养处理会降低胚胎的发育率.
이수우이피성섬유세포위공체세포,채용전융합방법,탐토세포송이소B(CB)대수우체세포핵이식효과적영향.체외성숙배양22～24 h적수우란모세포거핵후.장경0.1 mg/L Aphidicolin(APD)+0.5%FBS배양2～9 d적수우이피성섬유세포주사도란주극중재경전융합(100 V/mm,15μs,전맥충3차)구건핵이식중구배.중구배경화학격활후(5 μmol/L)리자매소5 min,2 mmol/L 6-DMAP 3 h)배양,7～9 d평정기배태발육능력.결과현시,재함CB(3 mg/L)적융합액중진행전융합후,핵이식적융합솔、중조배적존활솔、란렬솔화낭배솔여대조조(불함CB)상비균무현저차이(P>0.05);핵이식중조배격활전용함CB(6 mg/L)적배양액배양1 h,기격활후적존활솔(97.52%)화체외낭배발육솔(22.09%)균현저지고우미경CB처리적중조배적존활솔(93.87%)화낭배솔(13.25%,P<0.05);중조배경리자매소격활5 min후,재6-DMAP+CB중배양3 h적분렬솔명현저우방재6-DMAP중배양3 h적분렬솔(65.37% vs 78.92%,P<0.05),단낭배발육솔무현저차이(11.19% vs 10.96%,P>0.05).저표명수우체세포핵이식전융합시,융합액중불첨가CB,이핵이식중조배격활전경CB배양처리후,유리우배태적진일보발육,단격활후용CB배양처리회강저배태적발육솔.