CAJ | 학술논문

背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)及其死亡受体的功能性单克隆抗体具有杀伤肿瘤细胞的活性.我们研制了抗人死亡受体5(death receptor,DR5)功能性单克隆抗体(mDRA-6),本研究对其诱导Jurkat细胞凋亡的Caspase分子机制进行初步探讨.方法:mDRA-6作用后,琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞的DNA ladder;MTT法检测细胞存活情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析细胞凋亡情况;观察Caspase-10、-9、-8、-3等的抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡的抑制作用;免疫印迹技术检测凋亡信号蛋白caspase-10、-9、-8、-3,多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、BH3相关结构域死亡激动剂(BH3 interacting domain death agonist,Bid)、短缩的Bid(truncated Bid.tBid)、细胞色素C(cytochrome c,Cyto C)等活化裂解的情况.结果:琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6对Jurkat细胞具有明显的诱导凋亡作用且呈量.效关系.2.0μg/mL mDRA-6作用Jurkat细胞0.25h、0.5h、1h、2h,其凋亡率分别为16.2%、28.3%、69.2%、78.2%;Caspase-8抑制剂能明显抑制mDRA-6诱导的细胞凋亡.抑制率为77.9%,Caspase-3和Caspase-9抑制剂作用的抑制率分别为54.2%、8.7%,而Caspase-10的抑制剂无抑制作用;免疫印迹技术检测显示Caspase-8、-3、-9均呈现随时间延长酶原逐渐减少、活化片段增加的现象,PARP的降解片段亦增加,Bid激活降解为tbid.Cyto C大量释放,而Caspase-10酶原无明显改变、无活化片段出现.结论:mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡主要是通过激活Caspase路径和线粒体路径来完成的.
배경여목적:종류배사인자상관조망유도배체(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)급기사망수체적공능성단극륭항체구유살상종류세포적활성.아문연제료항인사망수체5(death receptor,DR5)공능성단극륭항체(mDRA-6),본연구대기유도Jurkat세포조망적Caspase분자궤제진행초보탐토.방법:mDRA-6작용후,경지당응효전영검측Jurkat세포적DNA ladder;MTT법검측세포존활정황;Annexin V-FITC/PI쌍염류식세포술정량분석세포조망정황;관찰Caspase-10、-9、-8、-3등적억제제대mDRA-6유도세포조망적억제작용;면역인적기술검측조망신호단백caspase-10、-9、-8、-3,다취ADP핵당취합매(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、BH3상관결구역사망격동제(BH3 interacting domain death agonist,Bid)、단축적Bid(truncated Bid.tBid)、세포색소C(cytochrome c,Cyto C)등활화렬해적정황.결과:경지당응효전영현시DNA정현명현제상대형;mDRA-6대Jurkat세포구유명현적유도조망작용차정량.효관계.2.0μg/mL mDRA-6작용Jurkat세포0.25h、0.5h、1h、2h,기조망솔분별위16.2%、28.3%、69.2%、78.2%;Caspase-8억제제능명현억제mDRA-6유도적세포조망.억제솔위77.9%,Caspase-3화Caspase-9억제제작용적억제솔분별위54.2%、8.7%,이Caspase-10적억제제무억제작용;면역인적기술검측현시Caspase-8、-3、-9균정현수시간연장매원축점감소、활화편단증가적현상,PARP적강해편단역증가,Bid격활강해위tbid.Cyto C대량석방,이Caspase-10매원무명현개변、무활화편단출현.결론:mDRA-6유도Jurkat세포조망주요시통과격활Caspase로경화선립체로경래완성적.