猪业科学
豬業科學
저업과학
SWINE INDUSTRY SCIENCE
2009年
5期
98-100
,共3页
袁东波%汤德元%黄涛%徐健%王彬
袁東波%湯德元%黃濤%徐健%王彬
원동파%탕덕원%황도%서건%왕빈
猪繁殖与呼吸综合征病毒%ORF5基因克隆%原核表达载体构建
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%ORF5基因剋隆%原覈錶達載體構建
저번식여호흡종합정병독%ORF5기인극륭%원핵표체재체구건
参照GanBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒核苷酸序列,利用生物软件,设计1对ORF5基因的特异性引物,用Trizol法提取病料的总RNA,进行RT-PcR扩增后获得目的基因,将其连接到PMD18-T载体后转入大肠杆菌Top10细胞中,抽提质粒并双酶切,回收目的基因,然后克隆于原核表达载体PET-32a(+)中,通过抗性筛选、酶切鉴定和序列测定,证实得到含有目的基因的阳性克隆,本实验成功构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因原核表达载体PET-ORF5,为进一步研究ORF5基因的原核表达及猪繁殖与呼吸综合征的基因工程疫苗的研究奠定了基础.
參照GanBank上髮錶的豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒覈苷痠序列,利用生物軟件,設計1對ORF5基因的特異性引物,用Trizol法提取病料的總RNA,進行RT-PcR擴增後穫得目的基因,將其連接到PMD18-T載體後轉入大腸桿菌Top10細胞中,抽提質粒併雙酶切,迴收目的基因,然後剋隆于原覈錶達載體PET-32a(+)中,通過抗性篩選、酶切鑒定和序列測定,證實得到含有目的基因的暘性剋隆,本實驗成功構建瞭豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒貴州分離株ORF5基因原覈錶達載體PET-ORF5,為進一步研究ORF5基因的原覈錶達及豬繁殖與呼吸綜閤徵的基因工程疫苗的研究奠定瞭基礎.
삼조GanBank상발표적저번식여호흡종합정병독핵감산서렬,이용생물연건,설계1대ORF5기인적특이성인물,용Trizol법제취병료적총RNA,진행RT-PcR확증후획득목적기인,장기련접도PMD18-T재체후전입대장간균Top10세포중,추제질립병쌍매절,회수목적기인,연후극륭우원핵표체재체PET-32a(+)중,통과항성사선、매절감정화서렬측정,증실득도함유목적기인적양성극륭,본실험성공구건료저번식여호흡종합정병독귀주분리주ORF5기인원핵표체재체PET-ORF5,위진일보연구ORF5기인적원핵표체급저번식여호흡종합정적기인공정역묘적연구전정료기출.
