CAJ | 학술논문

目的:研究禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗在鸡体内诱导的免疫保护效果.方法:PCR扩增禽多杀性巴氏杆菌的ompa基因片段,克隆入pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pOMPA,体外转染SP2/0细胞,RT-PCR和免疫荧光试验检测目的基因的转录及表达情况.动物免疫共分四组:pOMPA组、弱毒疫苗组、pCDNA3.1(+)空载体组和PBS对照组,每组15只4周龄鸡,除弱毒疫苗组外其他三组均肌注免疫三次,每次间隔两周,弱毒疫苗组仅首免时肌注1羽份/每只鸡.间接ELISA检测免疫后血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫鸡外周血淋巴细胞增殖情况,双抗夹心ELISA检测IFN～γ分泌情况,强毒攻击,计算免疫鸡存活数目及保护率.结果:体外转染检测结果表明pOMPA可在体外培养的细胞中表达目的蛋白.动物免疫后,DNA疫苗组和弱毒疫苗组血清抗体水平持续上升,与两对照组相比差异极显著(P＜0.01),且弱毒疫苗组血清抗体水平明显高于DNA疫苗组(P＜0.05).经提取的外膜蛋白(Omps)诱生后,两疫苗组的SI值极显著高于pCDNA3.1(+)组和PBS免疫组(P＜0.01),两疫苗组之间则无差别.两疫苗组免疫鸡外周血淋巴细胞产生的IFN-γ极显著高于两对照组(P＜0.01).强毒攻击后DNA疫苗组和弱毒疫苗组的保护率分别为60%和73.3%.结论:成功构建了禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗,该疫苗为动物提供一定的免疫保护力,但不够理想.
목적:연구금다살성파씨간균OmpA DNA역묘재계체내유도적면역보호효과.방법:PCR확증금다살성파씨간균적ompa기인편단,극륭입pcDNA3.1(+)상,구건중조질립pOMPA,체외전염SP2/0세포,RT-PCR화면역형광시험검측목적기인적전록급표체정황.동물면역공분사조:pOMPA조、약독역묘조、pCDNA3.1(+)공재체조화PBS대조조,매조15지4주령계,제약독역묘조외기타삼조균기주면역삼차,매차간격량주,약독역묘조부수면시기주1우빈/매지계.간접ELISA검측면역후혈청특이성항체수평,MTT법검측면역계외주혈림파세포증식정황,쌍항협심ELISA검측IFN～γ분비정황,강독공격,계산면역계존활수목급보호솔.결과:체외전염검측결과표명pOMPA가재체외배양적세포중표체목적단백.동물면역후,DNA역묘조화약독역묘조혈청항체수평지속상승,여량대조조상비차이겁현저(P＜0.01),차약독역묘조혈청항체수평명현고우DNA역묘조(P＜0.05).경제취적외막단백(Omps)유생후,량역묘조적SI치겁현저고우pCDNA3.1(+)조화PBS면역조(P＜0.01),량역묘조지간칙무차별.량역묘조면역계외주혈림파세포산생적IFN-γ겁현저고우량대조조(P＜0.01).강독공격후DNA역묘조화약독역묘조적보호솔분별위60%화73.3%.결론:성공구건료금다살성파씨간균OmpA DNA역묘,해역묘위동물제공일정적면역보호력,단불구이상.