陕西师范大学学报（自然科学版）
陝西師範大學學報（自然科學版）
협서사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHAANXI NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2011年
3期
73-77
,共5页
魏丽丽%强荣兵%张楠楠%刘月月%侯颖春
魏麗麗%彊榮兵%張楠楠%劉月月%侯穎春
위려려%강영병%장남남%류월월%후영춘
磷酸钙转染法%细胞转染%转染效率%肝癌细胞
燐痠鈣轉染法%細胞轉染%轉染效率%肝癌細胞
린산개전염법%세포전염%전염효솔%간암세포
为了探索磷酸钙法转染瘤细胞的最佳转染条件,以磷酸钙法将ANXA2特异性重组干扰质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入人肝癌细胞SMMC-7721并优化了以下转染参数:转染前细胞汇合率、质粒剂量、质粒复合物形成时间、孵育时间、血清、抗生素有无及细胞传代次数等.以荧光显微镜观察GFP表达、半定量RT-PCR和western blotting评估转染效率.结果显示,转染前细胞50%～60%汇合率、8μg质粒用量(直径30 mm培养皿)、20～30 min沉淀形成时间及6 h孵育时间转染效率较高;细胞传代次数及抗生素有无对转染效率影响不显著,但血清在实验条件下是必不可少的.转染48 h后,GFP表达进入高峰期、ANXA2 mRNA和蛋白水平下调(P＜0.05).
為瞭探索燐痠鈣法轉染瘤細胞的最佳轉染條件,以燐痠鈣法將ANXA2特異性重組榦擾質粒pU6H1-GFP-siANXA2導入人肝癌細胞SMMC-7721併優化瞭以下轉染參數:轉染前細胞彙閤率、質粒劑量、質粒複閤物形成時間、孵育時間、血清、抗生素有無及細胞傳代次數等.以熒光顯微鏡觀察GFP錶達、半定量RT-PCR和western blotting評估轉染效率.結果顯示,轉染前細胞50%～60%彙閤率、8μg質粒用量(直徑30 mm培養皿)、20～30 min沉澱形成時間及6 h孵育時間轉染效率較高;細胞傳代次數及抗生素有無對轉染效率影響不顯著,但血清在實驗條件下是必不可少的.轉染48 h後,GFP錶達進入高峰期、ANXA2 mRNA和蛋白水平下調(P＜0.05).
위료탐색린산개법전염류세포적최가전염조건,이린산개법장ANXA2특이성중조간우질립pU6H1-GFP-siANXA2도입인간암세포SMMC-7721병우화료이하전염삼수:전염전세포회합솔、질립제량、질립복합물형성시간、부육시간、혈청、항생소유무급세포전대차수등.이형광현미경관찰GFP표체、반정량RT-PCR화western blotting평고전염효솔.결과현시,전염전세포50%～60%회합솔、8μg질립용량(직경30 mm배양명)、20～30 min침정형성시간급6 h부육시간전염효솔교고;세포전대차수급항생소유무대전염효솔영향불현저,단혈청재실험조건하시필불가소적.전염48 h후,GFP표체진입고봉기、ANXA2 mRNA화단백수평하조(P＜0.05).
