华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
5期
558-562
,共5页
季思思%朱义广%彭东海%阮丽芳%孙明
季思思%硃義廣%彭東海%阮麗芳%孫明
계사사%주의엄%팽동해%원려방%손명
苏云金芽胞杆菌%质粒%特异引物%细菌人工染色体文库%克隆%复制子%缺失突变
囌雲金芽胞桿菌%質粒%特異引物%細菌人工染色體文庫%剋隆%複製子%缺失突變
소운금아포간균%질립%특이인물%세균인공염색체문고%극륭%복제자%결실돌변
利用特异引物从基因组BAC文库筛选到1个35 kb的片段,对该片段测序比对分析发现可能含有p26的复制区.为了验证该片段中是否含有p26的复制区,首先,将大肠杆菌和苏云金芽胞杆菌穿梭载体pHT304用EcoR I酶切切掉苏云金芽胞杆菌复制子后自连,获得复制子克隆载体pHT304E;随后,将12 kbEcoR I片段亚克隆到载体pHT304E上电转化无晶体突变株BMB171,获得具有抗性的转化子,证明该片段具有复制功能.缺失实验证明最小复制功能区包含2个必需的ORF.经过40代无抗培养,最小复制区复制稳定性达到90％以上.
利用特異引物從基因組BAC文庫篩選到1箇35 kb的片段,對該片段測序比對分析髮現可能含有p26的複製區.為瞭驗證該片段中是否含有p26的複製區,首先,將大腸桿菌和囌雲金芽胞桿菌穿梭載體pHT304用EcoR I酶切切掉囌雲金芽胞桿菌複製子後自連,穫得複製子剋隆載體pHT304E;隨後,將12 kbEcoR I片段亞剋隆到載體pHT304E上電轉化無晶體突變株BMB171,穫得具有抗性的轉化子,證明該片段具有複製功能.缺失實驗證明最小複製功能區包含2箇必需的ORF.經過40代無抗培養,最小複製區複製穩定性達到90％以上.
이용특이인물종기인조BAC문고사선도1개35 kb적편단,대해편단측서비대분석발현가능함유p26적복제구.위료험증해편단중시부함유p26적복제구,수선,장대장간균화소운금아포간균천사재체pHT304용EcoR I매절절도소운금아포간균복제자후자련,획득복제자극륭재체pHT304E;수후,장12 kbEcoR I편단아극륭도재체pHT304E상전전화무정체돌변주BMB171,획득구유항성적전화자,증명해편단구유복제공능.결실실험증명최소복제공능구포함2개필수적ORF.경과40대무항배양,최소복제구복제은정성체도90％이상.
