蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2012年
2期
292-298
,共7页
刘惠芬%高绘菊%王石宝%江峰%李轶女%张志芳%牟志美
劉惠芬%高繪菊%王石寶%江峰%李軼女%張誌芳%牟誌美
류혜분%고회국%왕석보%강봉%리질녀%장지방%모지미
斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株%ORF63基因%序列特征%原核表达%多克隆抗体
斜紋夜蛾覈型多角體病毒Ⅱ型分離株%ORF63基因%序列特徵%原覈錶達%多剋隆抗體
사문야아핵형다각체병독Ⅱ형분리주%ORF63기인%서렬특정%원핵표체%다극륭항체
斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型( SpltMNPVⅡ)分离株是繁殖率和毒力极强的新型病毒株,ORF63是该病毒分离株的一个功能未知基因.从SpltMNPVⅡ分离株基因组中克隆了ORF63.序列分析表明,该基因读码框为1 071 bp,编码356个氨基酸,蛋白质分子质量为41.3 kD;起始密码子ATG上游存在一个早期和晚期启动子基序,编码蛋白序列含有CNX、MutH等多种结构域.启动子活性和转录时相分析表明ORF63是一个早、晚期表达的基因,在病毒感染4h和18 h时有2个转录峰,24h以后转录水平略有下降,但总体趋于稳定.构建该基因的原核表达载体pET-28a-ORF63,并转化大肠杆菌BL21 (DE3),表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体,Western blot检测制备的多克隆抗体特异性较好,效价可达1∶3 200以上.由以上结果推测,SpltMNPVⅡ分离株的ORF63基因是一个早期和晚期均有表达的病毒基因,可能与SpltMNPVⅡ感染宿主细胞后自身DNA的复制有关,参与早期芽生病毒(BV)的发生和晚期包涵体衍生病毒(ODV)的成熟2个过程.
斜紋夜蛾覈型多角體病毒Ⅱ型( SpltMNPVⅡ)分離株是繁殖率和毒力極彊的新型病毒株,ORF63是該病毒分離株的一箇功能未知基因.從SpltMNPVⅡ分離株基因組中剋隆瞭ORF63.序列分析錶明,該基因讀碼框為1 071 bp,編碼356箇氨基痠,蛋白質分子質量為41.3 kD;起始密碼子ATG上遊存在一箇早期和晚期啟動子基序,編碼蛋白序列含有CNX、MutH等多種結構域.啟動子活性和轉錄時相分析錶明ORF63是一箇早、晚期錶達的基因,在病毒感染4h和18 h時有2箇轉錄峰,24h以後轉錄水平略有下降,但總體趨于穩定.構建該基因的原覈錶達載體pET-28a-ORF63,併轉化大腸桿菌BL21 (DE3),錶達併純化融閤蛋白後製備多剋隆抗體,Western blot檢測製備的多剋隆抗體特異性較好,效價可達1∶3 200以上.由以上結果推測,SpltMNPVⅡ分離株的ORF63基因是一箇早期和晚期均有錶達的病毒基因,可能與SpltMNPVⅡ感染宿主細胞後自身DNA的複製有關,參與早期芽生病毒(BV)的髮生和晚期包涵體衍生病毒(ODV)的成熟2箇過程.
사문야아핵형다각체병독Ⅱ형( SpltMNPVⅡ)분리주시번식솔화독력겁강적신형병독주,ORF63시해병독분리주적일개공능미지기인.종SpltMNPVⅡ분리주기인조중극륭료ORF63.서렬분석표명,해기인독마광위1 071 bp,편마356개안기산,단백질분자질량위41.3 kD;기시밀마자ATG상유존재일개조기화만기계동자기서,편마단백서렬함유CNX、MutH등다충결구역.계동자활성화전록시상분석표명ORF63시일개조、만기표체적기인,재병독감염4h화18 h시유2개전록봉,24h이후전록수평략유하강,단총체추우은정.구건해기인적원핵표체재체pET-28a-ORF63,병전화대장간균BL21 (DE3),표체병순화융합단백후제비다극륭항체,Western blot검측제비적다극륭항체특이성교호,효개가체1∶3 200이상.유이상결과추측,SpltMNPVⅡ분리주적ORF63기인시일개조기화만기균유표체적병독기인,가능여SpltMNPVⅡ감염숙주세포후자신DNA적복제유관,삼여조기아생병독(BV)적발생화만기포함체연생병독(ODV)적성숙2개과정.
