中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2003年
8期
629-632
,共4页
史皆然%李元%戚好文%李别虎%范雄林
史皆然%李元%慼好文%李彆虎%範雄林
사개연%리원%척호문%리별호%범웅림
穿梭载体%分枝杆菌%表达
穿梭載體%分枝桿菌%錶達
천사재체%분지간균%표체
目的构建能够携带外源蛋白基因并能在胞内表达的E.coli-BCG (Bacille Calmette-Guerin)穿梭载体. 方法用多聚酶链式反应(PCR)从结核分枝杆菌毒株H37Rv基因中扩增出结核分枝杆菌热休克蛋白(Hsp)60 N端6个氨基酸及其上游调控元件基因,克隆入E.coli-BCG穿梭载体pOLYG中,以屋尘螨抗原(Der p2)为外源蛋白,用间接免疫荧光染色法观察该载体介导的Der p2基因在牡牛分枝杆菌(M.vaccae)宿主中的表达. 结果经测序证实所克隆的Hsp60ss基因序列正确,所构建的胞浆内表达E.coli-BCG穿梭载体(pIC)能完成在大肠杆菌和M.vaccae细胞之间的穿梭,并介导抗生素抗性基因的表达,经免疫荧光检查外源基因Der p2可表达于M.vaccae宿主胞内,并受到培养温度的调节. 结论成功构建了在M.vaccae胞内表达外源蛋白的E.coli-BCG穿梭载体.
目的構建能夠攜帶外源蛋白基因併能在胞內錶達的E.coli-BCG (Bacille Calmette-Guerin)穿梭載體. 方法用多聚酶鏈式反應(PCR)從結覈分枝桿菌毒株H37Rv基因中擴增齣結覈分枝桿菌熱休剋蛋白(Hsp)60 N耑6箇氨基痠及其上遊調控元件基因,剋隆入E.coli-BCG穿梭載體pOLYG中,以屋塵螨抗原(Der p2)為外源蛋白,用間接免疫熒光染色法觀察該載體介導的Der p2基因在牡牛分枝桿菌(M.vaccae)宿主中的錶達. 結果經測序證實所剋隆的Hsp60ss基因序列正確,所構建的胞漿內錶達E.coli-BCG穿梭載體(pIC)能完成在大腸桿菌和M.vaccae細胞之間的穿梭,併介導抗生素抗性基因的錶達,經免疫熒光檢查外源基因Der p2可錶達于M.vaccae宿主胞內,併受到培養溫度的調節. 結論成功構建瞭在M.vaccae胞內錶達外源蛋白的E.coli-BCG穿梭載體.
목적구건능구휴대외원단백기인병능재포내표체적E.coli-BCG (Bacille Calmette-Guerin)천사재체. 방법용다취매련식반응(PCR)종결핵분지간균독주H37Rv기인중확증출결핵분지간균열휴극단백(Hsp)60 N단6개안기산급기상유조공원건기인,극륭입E.coli-BCG천사재체pOLYG중,이옥진만항원(Der p2)위외원단백,용간접면역형광염색법관찰해재체개도적Der p2기인재모우분지간균(M.vaccae)숙주중적표체. 결과경측서증실소극륭적Hsp60ss기인서렬정학,소구건적포장내표체E.coli-BCG천사재체(pIC)능완성재대장간균화M.vaccae세포지간적천사,병개도항생소항성기인적표체,경면역형광검사외원기인Der p2가표체우M.vaccae숙주포내,병수도배양온도적조절. 결론성공구건료재M.vaccae포내표체외원단백적E.coli-BCG천사재체.
