CAJ | 학술논문

目的为日本血吸虫病的防治寻求新的高效联合基因免疫策略.方法构建共表达日本血吸虫相对分子质量23 000表膜蛋白(Sj23)基因与鼠IL-12基因的核酸疫苗质粒pVIVO2-IL12-Sj23,转染HEK-293细胞,通过RT-PCR,Western blot及ELISA法检测Sj23和IL-12蛋白的表达.接种并攻击感染BALB/c小鼠,以减虫率和减卵率评价其免疫保护力,同时设攻击感染对照组、空白质粒pVIVO2组、pVIVO2-IL12组和pVIVO2-Sj23组.用ELISA法和Western Blot分析免疫小鼠血清中抗体.以脾细胞培养法检测经SEA刺激后,小鼠脾细胞分泌IFN-γ和IL-4的水平.并以FCM分析脾细胞亚群.结果经瞬时转染HEK-293细胞证明质粒pVIVO2-IL12-Sj23能在体外进行表达.免疫小鼠后获得了45.53%的减虫率和58.35%的减卵率,较单价DNA疫苗pVIVO2-Sj23免疫效果好(P<0.05).ELISA法和Western Blot检测抗体结果表明免疫小鼠产生了抗Sj23特异性IgG抗体.pVIVO2-IL12-Sj23免疫组IFN-γ的水平较对照组显著升高而IL-4水平较对照组低.攻击感染后各实验组小鼠脾细胞的CD4+, CD8+亚群比率无显著差别(P>0.05).结论 pVIVO2-IL12-Sj23 DNA疫苗具有诱导BALB/c小鼠产生较好的抗血吸虫感染免疫保护效果.细胞因子IL-12作为基因佐剂,具有诱导Th1型免疫反应从而增强DNA疫苗免疫保护性的作用.
목적위일본혈흡충병적방치심구신적고효연합기인면역책략.방법구건공표체일본혈흡충상대분자질량23 000표막단백(Sj23)기인여서IL-12기인적핵산역묘질립pVIVO2-IL12-Sj23,전염HEK-293세포,통과RT-PCR,Western blot급ELISA법검측Sj23화IL-12단백적표체.접충병공격감염BALB/c소서,이감충솔화감란솔평개기면역보호력,동시설공격감염대조조、공백질립pVIVO2조、pVIVO2-IL12조화pVIVO2-Sj23조.용ELISA법화Western Blot분석면역소서혈청중항체.이비세포배양법검측경SEA자격후,소서비세포분비IFN-γ화IL-4적수평.병이FCM분석비세포아군.결과경순시전염HEK-293세포증명질립pVIVO2-IL12-Sj23능재체외진행표체.면역소서후획득료45.53%적감충솔화58.35%적감란솔,교단개DNA역묘pVIVO2-Sj23면역효과호(P<0.05).ELISA법화Western Blot검측항체결과표명면역소서산생료항Sj23특이성IgG항체.pVIVO2-IL12-Sj23면역조IFN-γ적수평교대조조현저승고이IL-4수평교대조조저.공격감염후각실험조소서비세포적CD4+, CD8+아군비솔무현저차별(P>0.05).결론 pVIVO2-IL12-Sj23 DNA역묘구유유도BALB/c소서산생교호적항혈흡충감염면역보호효과.세포인자IL-12작위기인좌제,구유유도Th1형면역반응종이증강DNA역묘면역보호성적작용.