热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2007年
3期
222-225
,共4页
孙海峰%俞守义%欧程山%胡贵方
孫海峰%俞守義%歐程山%鬍貴方
손해봉%유수의%구정산%호귀방
结核分枝杆菌%Ag85A%重组腺相关病毒,2型%基因表达%细胞毒性T淋巴细胞活性
結覈分枝桿菌%Ag85A%重組腺相關病毒,2型%基因錶達%細胞毒性T淋巴細胞活性
결핵분지간균%Ag85A%중조선상관병독,2형%기인표체%세포독성T림파세포활성
目的 构建含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒并初步研究其免疫原性.方法 采用PCR法从结核杆菌H37Rv株扩增Ag85A基因,将PCR扩增产物克隆于2型腺相关病毒(AAV-2)表达质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-Ag85A;用脂质体转染的方法将重组质粒转入BHK-21细胞中,G418筛选得到能表达目的基因混合细胞系BHK-Ag85A;用具有rAAV-2包装功能的辅助病毒感染BHK-Ag85A,纯化后得到rAAV-2-Ag85A;Western blotting检测重组病毒Ag85A基因在BHK-21细胞中的表达;rAAV-2-Ag85A免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测血清中抗-Ag85A抗体,51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性.结果 PCR扩增的Ag85A基因唐列与GenBank公布的序列一致,纯化后得到的rAAV-2-Ag85A滴度为1×1012 virus particles/ml;Western blotting检测到rAAV-2-Ag85A在BHK-21细胞中能够表达出一相对分子质量为32 000的多肽;rAAV-2-Ag85A免疫的Balb/c小鼠,抗-Ag85A抗体的滴度可达1∶l 024,同时还可激发Ag85A特异性的CTL产生.结论 rAAV-2-Ag85A构建成功,rAAV-2-Ag85A免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现.rAAV-2-Ag85A对于防止结核分枝杆菌感染,尤其是作为结核病的治疗性疫苗可能具有潜在的应用价值,值得进一步深入研究.
目的 構建含結覈分枝桿菌Ag85A基因的2型重組腺相關病毒併初步研究其免疫原性.方法 採用PCR法從結覈桿菌H37Rv株擴增Ag85A基因,將PCR擴增產物剋隆于2型腺相關病毒(AAV-2)錶達質粒pSNAV中,構建重組質粒pSNAV-Ag85A;用脂質體轉染的方法將重組質粒轉入BHK-21細胞中,G418篩選得到能錶達目的基因混閤細胞繫BHK-Ag85A;用具有rAAV-2包裝功能的輔助病毒感染BHK-Ag85A,純化後得到rAAV-2-Ag85A;Western blotting檢測重組病毒Ag85A基因在BHK-21細胞中的錶達;rAAV-2-Ag85A免疫Balb/c小鼠,ELISA法檢測血清中抗-Ag85A抗體,51Cr釋放分析檢測細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活性.結果 PCR擴增的Ag85A基因唐列與GenBank公佈的序列一緻,純化後得到的rAAV-2-Ag85A滴度為1×1012 virus particles/ml;Western blotting檢測到rAAV-2-Ag85A在BHK-21細胞中能夠錶達齣一相對分子質量為32 000的多肽;rAAV-2-Ag85A免疫的Balb/c小鼠,抗-Ag85A抗體的滴度可達1∶l 024,同時還可激髮Ag85A特異性的CTL產生.結論 rAAV-2-Ag85A構建成功,rAAV-2-Ag85A免疫小鼠可以同時誘導體液和細胞免疫反應的齣現.rAAV-2-Ag85A對于防止結覈分枝桿菌感染,尤其是作為結覈病的治療性疫苗可能具有潛在的應用價值,值得進一步深入研究.
목적 구건함결핵분지간균Ag85A기인적2형중조선상관병독병초보연구기면역원성.방법 채용PCR법종결핵간균H37Rv주확증Ag85A기인,장PCR확증산물극륭우2형선상관병독(AAV-2)표체질립pSNAV중,구건중조질립pSNAV-Ag85A;용지질체전염적방법장중조질립전입BHK-21세포중,G418사선득도능표체목적기인혼합세포계BHK-Ag85A;용구유rAAV-2포장공능적보조병독감염BHK-Ag85A,순화후득도rAAV-2-Ag85A;Western blotting검측중조병독Ag85A기인재BHK-21세포중적표체;rAAV-2-Ag85A면역Balb/c소서,ELISA법검측혈청중항-Ag85A항체,51Cr석방분석검측세포독성T림파세포(CTL)활성.결과 PCR확증적Ag85A기인당렬여GenBank공포적서렬일치,순화후득도적rAAV-2-Ag85A적도위1×1012 virus particles/ml;Western blotting검측도rAAV-2-Ag85A재BHK-21세포중능구표체출일상대분자질량위32 000적다태;rAAV-2-Ag85A면역적Balb/c소서,항-Ag85A항체적적도가체1∶l 024,동시환가격발Ag85A특이성적CTL산생.결론 rAAV-2-Ag85A구건성공,rAAV-2-Ag85A면역소서가이동시유도체액화세포면역반응적출현.rAAV-2-Ag85A대우방지결핵분지간균감염,우기시작위결핵병적치료성역묘가능구유잠재적응용개치,치득진일보심입연구.
