细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
3期
201-204
,共4页
王雪峰%陈永井%王勤%杨科芳%代群%王凤鸣%张学光
王雪峰%陳永井%王勤%楊科芳%代群%王鳳鳴%張學光
왕설봉%진영정%왕근%양과방%대군%왕봉명%장학광
B、T淋巴细胞衰减子%基因转染%T细胞%增殖
B、T淋巴細胞衰減子%基因轉染%T細胞%增殖
B、T림파세포쇠감자%기인전염%T세포%증식
目的:构建B、 T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因转染的细胞作为免疫原, 并探讨该基因转染细胞在体外的生物学功能.方法:通过RT-PCR法从经PHA活化的人外周血T细胞中克隆出人BTLA编码区全长基因, 经EcoR I和BamH I双酶切后插入逆转录病毒载体pEGZ-Term中构建成重组载体pEGZ-Term/BTLA.用脂质体法以重组逆转录病毒载体转染293T细胞, 并用Zeocin抗生素进行长期筛选; 流式细胞术分析BTLA在基因转染细胞膜上的表达; 通过MTT法和流式细胞术探讨基因转染细胞在体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响.结果:流式细胞术检测表明BTLA基因转染的293T细胞膜上能稳定地高表达人BTLA蛋白.BTLA基因转染的293T细胞和T细胞体外共培养显示, 与未转染的293T细胞相比, 该基因转染的细胞能部分地抑制抗人CD3单克隆抗体(mAb)刺激的T细胞增殖; 流式细胞术和ELISA法分析揭示, 该基因转染的细胞能够下调T细胞表面活化标志CD25的表达并降低IFN-γ和IL-10 的分泌.结论:获得稳定高表达人BTLA基因转染的细胞株.该细胞株在体外对抗人CD3 mAb刺激的T细胞的增殖与活化具有部分地抑制作用.
目的:構建B、 T淋巴細胞衰減子(BTLA)基因轉染的細胞作為免疫原, 併探討該基因轉染細胞在體外的生物學功能.方法:通過RT-PCR法從經PHA活化的人外週血T細胞中剋隆齣人BTLA編碼區全長基因, 經EcoR I和BamH I雙酶切後插入逆轉錄病毒載體pEGZ-Term中構建成重組載體pEGZ-Term/BTLA.用脂質體法以重組逆轉錄病毒載體轉染293T細胞, 併用Zeocin抗生素進行長期篩選; 流式細胞術分析BTLA在基因轉染細胞膜上的錶達; 通過MTT法和流式細胞術探討基因轉染細胞在體外對T淋巴細胞增殖與活化的影響.結果:流式細胞術檢測錶明BTLA基因轉染的293T細胞膜上能穩定地高錶達人BTLA蛋白.BTLA基因轉染的293T細胞和T細胞體外共培養顯示, 與未轉染的293T細胞相比, 該基因轉染的細胞能部分地抑製抗人CD3單剋隆抗體(mAb)刺激的T細胞增殖; 流式細胞術和ELISA法分析揭示, 該基因轉染的細胞能夠下調T細胞錶麵活化標誌CD25的錶達併降低IFN-γ和IL-10 的分泌.結論:穫得穩定高錶達人BTLA基因轉染的細胞株.該細胞株在體外對抗人CD3 mAb刺激的T細胞的增殖與活化具有部分地抑製作用.
목적:구건B、 T림파세포쇠감자(BTLA)기인전염적세포작위면역원, 병탐토해기인전염세포재체외적생물학공능.방법:통과RT-PCR법종경PHA활화적인외주혈T세포중극륭출인BTLA편마구전장기인, 경EcoR I화BamH I쌍매절후삽입역전록병독재체pEGZ-Term중구건성중조재체pEGZ-Term/BTLA.용지질체법이중조역전록병독재체전염293T세포, 병용Zeocin항생소진행장기사선; 류식세포술분석BTLA재기인전염세포막상적표체; 통과MTT법화류식세포술탐토기인전염세포재체외대T림파세포증식여활화적영향.결과:류식세포술검측표명BTLA기인전염적293T세포막상능은정지고표체인BTLA단백.BTLA기인전염적293T세포화T세포체외공배양현시, 여미전염적293T세포상비, 해기인전염적세포능부분지억제항인CD3단극륭항체(mAb)자격적T세포증식; 류식세포술화ELISA법분석게시, 해기인전염적세포능구하조T세포표면활화표지CD25적표체병강저IFN-γ화IL-10 적분비.결론:획득은정고표체인BTLA기인전염적세포주.해세포주재체외대항인CD3 mAb자격적T세포적증식여활화구유부분지억제작용.
