中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2008年
11期
967-971,975
,共6页
刘丽丽%万琳%尹丙姣%杨林%曾庆岭%李清芬%李卓娅
劉麗麗%萬琳%尹丙姣%楊林%曾慶嶺%李清芬%李卓婭
류려려%만림%윤병교%양림%증경령%리청분%리탁아
跨膜TNF-α%分泌型TNF-α%定点突变%胞毒效应
跨膜TNF-α%分泌型TNF-α%定點突變%胞毒效應
과막TNF-α%분비형TNF-α%정점돌변%포독효응
目的:研究膜型、分泌型TNF-α的31位氨基酸在其生物学效应中的作用,进一步探讨TNF-α结构与生物学效应的关系.方法:采用重叠PCR方法将wt TNF-α 31位精氨酸(R)密码子(CGC)定点突变替换成亮氨酸(L)密码子(CTC),构建R31L TNF-α-pcDNA3.0重组质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,采用脂质体转染法将其瞬时转染COS-7细胞进行表达,通过MTT法检测R31L TNF-α突变体的胞毒效应.结果:酶切、PCR及测序鉴定证实目的基因R31L TNF-α正确连接到pcDNA3.0的多克隆位点;TNF-α 31位突变可增强sTNF-α的胞毒效应,突变体的CC50值是野生型的1/10,而对mTNF-α的生物学效应无明显影响.结论:本实验成功地构建了R31L TNF-α-pcDNA3.0重组质粒,且在真核细胞COS-7中获得表达;TNF-α 31位置换成亮氨酸后,主要增强其分泌型分子的胞毒效应,而对其膜分子无作用.
目的:研究膜型、分泌型TNF-α的31位氨基痠在其生物學效應中的作用,進一步探討TNF-α結構與生物學效應的關繫.方法:採用重疊PCR方法將wt TNF-α 31位精氨痠(R)密碼子(CGC)定點突變替換成亮氨痠(L)密碼子(CTC),構建R31L TNF-α-pcDNA3.0重組質粒,經酶切、PCR及DNA測序鑒定後,採用脂質體轉染法將其瞬時轉染COS-7細胞進行錶達,通過MTT法檢測R31L TNF-α突變體的胞毒效應.結果:酶切、PCR及測序鑒定證實目的基因R31L TNF-α正確連接到pcDNA3.0的多剋隆位點;TNF-α 31位突變可增彊sTNF-α的胞毒效應,突變體的CC50值是野生型的1/10,而對mTNF-α的生物學效應無明顯影響.結論:本實驗成功地構建瞭R31L TNF-α-pcDNA3.0重組質粒,且在真覈細胞COS-7中穫得錶達;TNF-α 31位置換成亮氨痠後,主要增彊其分泌型分子的胞毒效應,而對其膜分子無作用.
목적:연구막형、분비형TNF-α적31위안기산재기생물학효응중적작용,진일보탐토TNF-α결구여생물학효응적관계.방법:채용중첩PCR방법장wt TNF-α 31위정안산(R)밀마자(CGC)정점돌변체환성량안산(L)밀마자(CTC),구건R31L TNF-α-pcDNA3.0중조질립,경매절、PCR급DNA측서감정후,채용지질체전염법장기순시전염COS-7세포진행표체,통과MTT법검측R31L TNF-α돌변체적포독효응.결과:매절、PCR급측서감정증실목적기인R31L TNF-α정학련접도pcDNA3.0적다극륭위점;TNF-α 31위돌변가증강sTNF-α적포독효응,돌변체적CC50치시야생형적1/10,이대mTNF-α적생물학효응무명현영향.결론:본실험성공지구건료R31L TNF-α-pcDNA3.0중조질립,차재진핵세포COS-7중획득표체;TNF-α 31위치환성량안산후,주요증강기분비형분자적포독효응,이대기막분자무작용.
