中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2010年
2期
305-310
,共6页
陈琦%沈杰芳%芮红兵%苏津自%卓光生%康日辉%林珺芳
陳琦%瀋傑芳%芮紅兵%囌津自%卓光生%康日輝%林珺芳
진기%침걸방%예홍병%소진자%탁광생%강일휘%림군방
p53基因%p16基因%pBudCE4.1%基因转染%凋亡
p53基因%p16基因%pBudCE4.1%基因轉染%凋亡
p53기인%p16기인%pBudCE4.1%기인전염%조망
本研究构建p53,p16基因真核表达载体,用脂质体法转染入白血病细胞,观察其在白血病细胞中的表达和对白血病细胞的作用.设计并构建包含野生型p53cDNA与p16cDNA的真核双表达载体pBudCE4.1-53-16,用脂质体法转染白血病细胞,用间接免疫细胞化学法、Western blot法检测鉴定外源性p53及p16的表达情况.通过CCK-8,流式细胞仪检测细胞的生长曲线、细胞周期、细胞凋亡.结果发现:p53 p16基因双表达真核载体构建成功,体外转染入白血病细胞后能检测到外源性P53、P16蛋白在白血病细胞中表达.转染48小时后.试验组与对照组比较,细胞周期阻滞(p<0.001);试验组和对照组比较,细胞增殖下降,细胞凋亡增加(p<0.001).结论:重组质粒pBudCE4.1-53-16构建成功,经体外转染白细胞细胞后2个目的基因能够在细胞中同时表达,并引起细胞周期阻滞于G0期,细胞凋亡增加.
本研究構建p53,p16基因真覈錶達載體,用脂質體法轉染入白血病細胞,觀察其在白血病細胞中的錶達和對白血病細胞的作用.設計併構建包含野生型p53cDNA與p16cDNA的真覈雙錶達載體pBudCE4.1-53-16,用脂質體法轉染白血病細胞,用間接免疫細胞化學法、Western blot法檢測鑒定外源性p53及p16的錶達情況.通過CCK-8,流式細胞儀檢測細胞的生長麯線、細胞週期、細胞凋亡.結果髮現:p53 p16基因雙錶達真覈載體構建成功,體外轉染入白血病細胞後能檢測到外源性P53、P16蛋白在白血病細胞中錶達.轉染48小時後.試驗組與對照組比較,細胞週期阻滯(p<0.001);試驗組和對照組比較,細胞增殖下降,細胞凋亡增加(p<0.001).結論:重組質粒pBudCE4.1-53-16構建成功,經體外轉染白細胞細胞後2箇目的基因能夠在細胞中同時錶達,併引起細胞週期阻滯于G0期,細胞凋亡增加.
본연구구건p53,p16기인진핵표체재체,용지질체법전염입백혈병세포,관찰기재백혈병세포중적표체화대백혈병세포적작용.설계병구건포함야생형p53cDNA여p16cDNA적진핵쌍표체재체pBudCE4.1-53-16,용지질체법전염백혈병세포,용간접면역세포화학법、Western blot법검측감정외원성p53급p16적표체정황.통과CCK-8,류식세포의검측세포적생장곡선、세포주기、세포조망.결과발현:p53 p16기인쌍표체진핵재체구건성공,체외전염입백혈병세포후능검측도외원성P53、P16단백재백혈병세포중표체.전염48소시후.시험조여대조조비교,세포주기조체(p<0.001);시험조화대조조비교,세포증식하강,세포조망증가(p<0.001).결론:중조질립pBudCE4.1-53-16구건성공,경체외전염백세포세포후2개목적기인능구재세포중동시표체,병인기세포주기조체우G0기,세포조망증가.
